急性高眼压兔眼视网膜中过氧亚硝基阴离子的表达及葛根素对其表达的影响.pdfVIP

中 文 摘 要 急性高眼压兔眼视网膜中过氧亚硝基阴离子的表达及 葛根素对其表达的影响 摘 要 目的:青光眼是一种常见的致盲性眼病，其视神经损伤 的病理基础是视网膜神经节细胞 (retinalganglion cells,RGCs)及其神经纤维的丧失，治疗的最终目标在于阻 止RGCs的损害和保护视功能。多种因素在青光眼的发病中 起重要作用，病理性高眼压可造成RGCs轴索受压、轴浆流 受阻，使RGCs受损、变性并最终以凋亡的形式丧失。近年 来，随着对一氧化氮 (NitricOxide,NO)研究的逐步深入， 人们发现过氧亚硝基阴离子 (peroxynitrite,ONOO)是NO 发挥病理损伤作用的主要环节。ONOO一是NO与超氧阴离子 (superoxide,q.)迅速反应生成的强氧化剂。Neufeld等发 现在青光眼患者的视网膜中有过量ONOO一的特异性标志物- 硝纂酪氨酸 (nitrotyrosine,NT)存在，ituONOO一对视网膜的 损伤机制尚不十分清楚。本研究旨在通过建立急性高眼压模 型，探讨ONOO一在视网膜中的表达及其损伤机制，并观察葛 根素对其表达的影响，为进一步研究青光眼时RGCs的损伤 机制和视功能的保护机制提供有价值的理论依据。 方法: l实验动物及模型建立:将33只成年健康新西兰大白 兔随机分为四组:(1)正常对照组 (6只眼);(2)实验组:按照 高眼压后不同时间段分为再灌注6,12,24和72h组，每组 各6只眼;(3)治疗I组:每组各6只眼，时间段分组同实验 中文 摘 要 组，在造模前12h及10min均给予葛根素注射液 (50mg/kg) 兔耳缘静脉缓慢注射，随后每隔5h再予以等量注射;(4)治 疗II组:每组各 6只眼，时间段分组同前，给予维生素 C (vitaminC,VitC)注射液(40mg/kg)耳缘静脉缓慢注射，注 射时间同治疗I组。采用前房灌注升高眼内压的方法建立急 性高眼压动物模型。各组分别在模型成立后相应时间点摘除 动物眼球，制成石蜡切片。 2病理组织学观察:切片经HE染色，在光镜下观察视 网膜组织的病理变化。 3TUNEL法检测凋亡细胞:光镜下观察神经节细胞层 中阳性细胞(胞核为棕色者为阳性凋亡细胞)，每张切片随机 选取4个视野，以阳性RGCs数与所测视野中神经节细胞层 长度的比值作为TUNEL标记的凋亡细胞指数。 4免疫组化方法检测 ONOO一的标志物一N‘7，的表达:光 镜下观察，细胞浆呈棕黄色者为NT表达阳性，应用多功能 真彩色病IN图像分析系统(4.0版)对NT的着色强度进行分 析。 结果: 1病理组织学改变:实验组兔眼视网膜在急性高眼压后 6h，神经纤维层和内丛状层明显水肿，12hRGCs空泡变性、 核固缩，24h视网膜水肿消失，神经纤维层变薄、萎缩，RGCs 数目减少;治疗I、11组视网膜水肿程度较实验组减轻， RGCs空泡变性及细胞核固缩现象较少，RGCs数目也多于实 验组。 2凋亡 (TUNEL)阳性细胞的表达情况:正常视网膜组 织未见凋亡细胞;实验组在高眼压后6h，神经节细胞层及内 一 一 .，一 .- 一 一 .呀- - ~- 2 中 文 摘 要 核层可见少量凋亡阳性细胞，1211时阳性细胞开始增多，2411 时达到高峰，7211时阳性细胞数减少;治疗I组凋亡细胞的 表达趋势与实验组基本一致，但各时间段RGCs凋亡指数均 较实验组明显减小，差异有统计学意义 (P0.01);治疗II 组凋亡指数与同时间段实验组相比，均无显著性差异 (尸 0.05)，与治疗I组相比，各时间段的凋亡指数均较高，且有 显著性差异 (P0.01). 2 ONOO一的特异性标志物一NT的表达情况:NT主要 在内界膜、神经纤维层及神经节细胞层表达。正常对照组棕 黄色着色极浅;实验组611:内界膜、神经纤维层及神经节细 胞层栋黄色着色较浅，l2h:着色程度加深，2411:最