ASCI后两种cNOS亚型的变化及L-Arg对其影响的实验研究.pdfVIP

审文箍要 前 言 f (蠹夔损伤后会出现器发牲损伤及由其弓l起的一系列级联放大 的迟发性神经坏死而造成的继发性损伤，同时也会出现一系列保 护修复姓的反应，羰渡少脊髓损伤并促进脊髓损伤的修复。嚣翦 研究发现SCI后，NO／NOS既有损伤作用又有保护作用。NO／NOS 对SCI夔损伤主要是扶享孛经生化方蘑趣夔SCI，西猿少脊髓损伤及 促进麒修复主要是通过血管机制进行的。同时研究发现，eNOS的 嚣个逆型中，nNOS在辨缀生化方面热重SCI孛趁重要作照，嚣 eNOS在血臀机制方面减轻脊髓损伤及促进修复中起主要作用。 瑟ASCI磊嚣静eNOS如俺变化凌待进一步研究。手零实验鹭在骚 究ASCI后两种eNOS亚烈如何变化，及腹腔注射L—Arg对其的 影镌，为扶NO／NOS入手，揉铡SCI磊的损伤撬铡，发挥SCI后约 保护机制，从而找到治疗SCI的最佳方法奠定基础。 f实验材料 ＼ 一、实验动物及分组 德康纯系Wistar太鼠SO只，雌雄不分，体羹250～3009，随机 分组。 轰组：燕常对照缝5哭。4 B组：假手术缀15只。行单纯椎板切除术，分术后30分、1小 嚣雩、2小时三个时煮，每个时点各隽5灵。 C组：单纯SCI组15只。进行SCI，分术后30分、1小时、2小 时三个时点，每令时点各炎5哭。 D组：SCI及腹腔注射L—Arg组15只：SCI后立即予以腹腔 、 ．1． 、r 注射L—Arg，29／Kg，分术后30分、1小时、2小时三个时点，每个 时点各为5只。 二、主要试剂 1．兔抗鼠nNOS抗体及eNOS抗体 2．即用型SABC试剂盒及DAB显色试剂盒 3．L—Arg注射液59／20lIll 三、主要仪器 1．改良Allen’S打击器(自制) 2．石蜡切片机 BX60光学显微镜，XIO手术用显微镜 3．Olympus 4．01ympus／DPl0显微数码照相机 c—W95软件，MemMorph全自动真彩色图像分析 5．Olympus 仪 实验方法 一、动物模型制备 应用Allen’S重物打击法造成实验组大鼠胸髓(T10)节段中 度损伤。致伤能量为809·cm；假手术组仅行T10全椎板切除术， 不损伤脊髓。 二、标本采集，石蜡切片的制作、HE及免疫组织化学染色 对照组，行椎板切除术后于×10手术用显微镜下直接将脊髓 标本取出；假手术组，单纯切开椎板后，分别于30分、1小时、2小 时三个时点将脊髓标本取出；SCI组，于脊髓损伤后分别于30分、 1小时、2小时三个时点取材；SCI+L—A玛组：脊髓损伤后，立即 点取材。上述标本取材后制成石蜡切片，分别行liE染色及免疫 ·2· 色。 三、标本的观测及实验结果的分析 t。竞镜下通过HE染色观察各组脊髓攒伤情况。 2．光镜下观察备组nNOS及eNOS染色，比较静组阳性物质 静分帮。 3．图像分析：每组取5张免疫组化切片，每张切片从前角至 震煮备敬5个赛倍视野进行隧像采集及窭像分撬。测定nNOS及 value，AG)筒光密 eNOS阳性反臆物的平均灰度值(Average gray density，OD)。对实验数据进褥统计学分据，耩方差 度懂(Optical 分析及t检验，P0．05为宿显著健差异。 实验貉果 一、HE染莛及免液缝稼漆色结慕 1．正常对照组及假手术组