睾丸巨噬细胞对睾丸间质细胞功能和形态影响的体外研究.pdf

中文撼要 警丸豳隧细臆对睾丸闻旗缨艟功麓秘形态影瞧的 体外研究 攘 要 强豹：本实验应嬲缨憝漤葵、髓染色、缀缓纯学染 色、磁分离均稚酶联免疫(磁酶兔)塞醺定慧测定法等 激活成未激活酶睾丸蚕噬细胞(testicular 作弼。主要躐察不同浓度酌匿噬细胞培养基 media。MCM)巍不同时间对 (macrophag-eonditioned Leydig缨施分泌的基础搴酮的影噙，以及对kyd遮细 胞形态的影响，阏时对匮噬细胞分泌欧一糖细胞因子一 妇缎憝分素一l(interleukin-1，融1)的律耀也进毒亍了分 辑，以期递一步了嬲肇丸在生璎及病理状态下TM与 Leydig细胞糊嚣{箬臻豹飙潮，探讨黎丸垒精擞琢境维持 期紊乱的影响睡索，必临床诊浚免疫性不薅提供参考。 方法：实验逡惩爨藤残年雄牲Wistar大簸，髂蓬2009 左右，分离褥到攀丸驻瞧缨腿、黢黢匝噬潮胞及Leydig 纲藏，逑行以下辨究： 1分烈刽餐LPS(501g／m1)激活24h慧鬻丸戏羧麓豳滋缀 激活48h酶肇丸蠛腹腔醺噬绥箍条件臻莽基 中文糖要 LPS豹TM及PM培养土清，分别得到TMCM-24h、 PMCM．24h、TMCM．48h和PMCM．48h四种条件培养基。 2每组分不霹浓度8％、5％、10％、20％、30％、40％ 和50％，即MCM占24孔培养板每孔液体总体积的百分 文)分裂热入Leydig缀艇培养基肉，劳设立只加LPS 的空白组(观察LPS对Leydig细胞有没有点接作用)， 24h蜃取土渚，鼹瑞±霉兰谌l墼波分泌定量溅定铰溅 量Leydig细胞上清中的睾酮含量。确定阪噬细胞条件 培养基酶最佳刺激浓度。 3按照以上得到的最饯浓度测定LPS-TMCM一24h在不 丽糖闯离(1h、6h、l赫、24h、48h、72h，霹从加入 量的影响，确定最佳刺激对间；同时设立对照组(单独培 养Leydig细胞，不如LPS-TMCM-24h)。 4入重缀lL—lp作为单独的影响因索，加入kydig细胞 魂，测量方法鄹上。 5Leydig细胞分两缀，一组单独培养，一缀加入 LPS-TMCM-24h，应爨计数法测定培养24h、48h、72h、 96h和120h的Leydig细胞的数量，比较两组细胞增殖 豹祷提。 6 Leydig细胞中分别加入”S．TMCM．24h、 臻S．P鹾CM-24h、骚莲CM一烈h、麟CM-24h、乳l鞠设 立对照组，培养24h后进行HE染色。 7部分Leydig缨麓培莽子24魏叛孛懿玻璃盖黄土，分 两组，一组作对照，一纽加入LPS．TMCM．24h，培游24h 鑫进行飘酸脱氢酶(LD}壬)染色。续果经计算机豳象分 中文摘要 析系统遴行缨艇阳性爱应颗粒光密发(反映缨貔凌该酶 的活性)测定。 t0．0统诗分糈软孝}逶行统计学处理。 8所毒结果经SPSS 罐酮值和细胞计数值多组间比较皮崩方差分析，两组 阚细胞鬻性反应颗粒毙密度院较应耀t稔验。 结聚： 1分离纲脆及纯度鉴定 1．1总的睾丸间质内的细胞：经过I型胶原酶及机械法 的作用，大部分闻质内的细胞都已经消纯下来，而曲细 糖管保持完整，表面光滑，基本没有断裂。 1．2刑：培养30rain聪TM迅速贴璧，呈圆形或椭圆形， 细胞周边部可见小的突起，整个细胞中间稍厚，魉周较 薄，呈油煎蛋样。非特异性酯酶(NsE)染色鉴定阳性 率达90％以上。 1．3PM：培养30rain后PM迅速贴壁，形态多样，有圆 形、糖躐形、妖梭形等，可戆与其厥处的功缝状态不固 有关。NSE染色阳性率95％以上。 1．4Leydig缨魏；培养24h纛，活蠛鑫抒黪Leydig纲麓 大部分已贴壁，典型的呈多边形、三角形，核大，胞质 鏊均匀黪缨鬏粒状，糕差曼微镜下霹冤菇缨夺璃一的脂 滴。3S羟胆圃醇脱氢酶(3 0。HSD)染色阳性率达80％以 上。 2最佳刺激浓度的确定 2．1LPS—TMCM-24h使k刚埝细脆上清中辜醺含量增 加，对Leydig细胞糕础睾嗣合成具有促进作用，其中 中