RP-HPLC法测定龙胆泻肝制剂中马兜铃酸A含量及药物动力学研究.pdfVIP

中 文 摘 要 RP-HPLC法测定龙胆泻肝制剂中马兜铃酸A 含量及其药物动力学研究 摘 要 1.RP-HPLC法测定龙胆泻肝制剂中马兜铃酸A含量 龙胆泻肝为我国中药方剂中传统名方，也是中国药 典2000年版一部收载的品种。该方剂包括三种制剂即 丸剂 (水丸、蜜丸)、口服液和片剂，均由龙胆、柴胡、 黄答、桅子、泽泻、木通、车前子、当归、地黄、炙甘 草组成，具有清肝胆，利湿热的功效，临床用于治疗肝 胆湿热，头晕目赤，耳鸣耳聋，耳肿疼痛，协痛口苦， 尿赤涩痛，湿热带下。 然而，自从美国食品和药品管理局 ((FDA)公布通 告禁止含马兜铃酸A或怀疑含马兜铃酸A的药剂的生 产、销售、进口以来，很多国家都限制了含马兜铃酸A 药剂的使用。按照这一通告，龙胆泻肝丸(水丸、蜜丸)、 口服液和片剂均在受禁之列。我国国家药品监督局已作 出慎用龙胆泻肝丸的规定。广大医务工作者己经在慎重 对待或研究其毒性。 龙胆泻肝方剂中含有的马兜铃酸A具有一定的肾毒 性，尤其是马兜铃酸A在体内可以蓄积。则深入研究制 剂中含有的马兜铃酸A的多少具有重要的临床意义。 目的:采用反相高效液相色谱法测定龙胆泻肝丸 (水 丸)、口服液和片剂中马兜铃酸A的含量，以比较它们含 中 文 摘 要 有的马兜铃酸A量的差异。 方法:(1)提取:龙胆泻肝丸 (水丸)和其片剂细粉 以甲醇索氏回流提取后，蒸干溶剂，残渣用 0.5%的氢氧 化钠溶液溶解，酸化后用氯仿分次振摇提取 (龙胆泻肝口 服液直接酸化用氯仿提取)，将提取液蒸干，甲醇溶解。 (2)色谱条件:选择合适的固定相，调整流动相的组成、 配比、流速以使马兜铃酸 A色谱峰分离完全。(3)系统 适用性试验:在确定的色谱条件下，考察马兜铃酸A色 谱峰的分离度、理论板数、对称度等是否符合要求。(4) 标准曲线的制备:配制系列浓度的马兜铃酸A对照品溶 液，分别进样测定峰面积，以马兜铃酸A对照品溶液浓 度为横坐标，相应的峰面积为纵坐标绘制标准曲线 (5) 最低检测限试验:逐步稀释马兜铃酸 A对照品溶液，进 样，直至马兜铃酸A色谱峰的峰高为噪声三倍。(6)稳 定性试验:取供试品溶液分别放置0,2,4,6,8,10, 12h后，按已确定的色谱条件测定峰面积。(7)精密度试 验:取龙胆泻肝丸 (水丸)，制备供试品溶液，按己确定 的色谱条件重复进样5次，记录峰面积。(8)重现性试验: 取同一龙胆泻肝丸 (水丸)5份，制备供试品溶液后，进 样，测定马兜铃酸A的含量。(9)回收率试验:依次取 龙胆泻肝丸 (水丸)的细粉适量，分别加入马兜铃酸 A 对照品溶液，进样，测定马兜铃酸A的含量。(10)样品 含量测定:分别取龙胆泻肝丸 (水丸)、龙胆泻肝口服液、 龙胆泻肝片，制备供试品溶液，进样，按外标法计算马兜 铃酸A的含量。 结果:(1)最佳色谱条件:C,:色谱柱，紫外检测器， 中 文 摘 要 以甲醇一水一冰醋酸 (59:40:1)为流动相，检测波长为 315nm，流速为 1.Oml-minl，柱温为25C，灵敏度: LOAUFS，进样量为20川。(2)系统适用性试验:在上述 色谱条件下，马兜铃酸 A峰形良好，无杂质峰干扰，其 理论塔板数大于4000，不对称因子为0.98-1.16，保留时 间为18.9min左右，与相邻色谱峰的分离度均大于3口(3) 标准曲线的绘制:马兜铃酸A浓度在1.33-26.6pg-ml-’范 围内与峰面积有 良好的线性关系，回归方程为 Y= 0.4105X+0.8714，相关系数r=0.9995(n二8)0(4)最低 检测限:最低检测浓度为1.33ng-m1-1o(5)样品稳定性 试验:样品溶液在12h内稳定。(6)样品精密度试验:重 复进样5次后，峰面积的RSD为0.77%0(7)样品重现 性试验:马兜铃酸A含量的相对标准偏差为2.74%，重现 良好。(8)回收率试验:样品的平均回收率为98.61%. RSD为0.34% 。(9)含量测定结果:龙胆泻肝丸(水丸) 中马兜铃酸A的量为0.0125%，龙胆泻肝片中马兜铃酸A 的量为0.0006%，龙胆泻肝