核因子κB与肝星状细胞增殖及凋亡.pdf

中文摘要 核因子KB与肝星状细胞增殖及凋亡 摘 要 fibrosis)是慢性肝病的共同病理 肝纤维化(hepatic 学基础，是形成肝硬化的必经病理阶段，其特征是以胶 原为主的细胞外间质(extracellularmatrix，ECM)成分合 成增多和／或降解相对不足而在肝内过量沉积。尽管不同 肝病的发病机制有所不同，但其发生纤维化的最终途径 stellate 相似，其中最关键的环节是肝星状细胞(hepatic cells，HSCs)的激活。HSCs是产生ECM的主要来源， HSCs的活化和增殖是肝纤维化发生的关键。越来越多 的研究认为HSCs活化和增殖与其凋亡受到抑制有关， factor 而核因子vd3(nuclearB，NF—rd3)能抑制多 kappa 种类型的细胞凋亡。因此，NF-lcB已成为当前研究的热 点之一。 NF．f13是一个广泛存在的转录调节因子，参与诸多 病理、生理过程的基因调控，并在细胞的抗凋亡过程中 发挥至关重要的作用。其在静止态HSCs中并无活性， 但在激活态HSCs中活性却持续存在。因此，有理由相 信NF．1cB可能通过抑制HSCs凋亡而使活化的HSCs数 量维持在相当水平，最终导致肝纤维化的发生。 作为可诱发的转录调节因子，NF—KB结合位点可接 necrosis 受多种免疫刺激，如肿瘤坏死因子c【(tumor factor 中文摘要 紫外线照射、电离幅射、炎症性细胞因子、生长因子以 及细菌或病毒感染等均可激活NF．KB。其中许多诱导 NF—KB的刺激物都能通过诱导氧化应激反应而激活 NF，rd3，故反应性氧中间体(reactive oxygen dithiocarbamate， 用。吡咯烷二硫氨基甲酸盐(pyrrolidine PDTC)既能直接清除ROIs，又能够与ROIs相关酶中的 金属离子发生螯合作用，从而抑制这些酶的活性，减少 ROIs的产生。因此PDTC可以有效地拮抗NF．v．B活性， 诱导HSCs凋亡。 迄今为止，NF—v．B参与多种炎症、免疫、细胞增殖 和凋亡等病理、生理过程的调控已见较多报道，但NF．nB 在肝纤维化及HSCs增殖、凋亡中的作用报道甚少。为 此，本研究以NF—rJ3为切入点，有机结合整体和离体实 验，研究NF-rd3在肝纤维化过程中的动态表达以及 PDTC对TNFot刺激的肝星状细胞凋亡的诱导作用。实 验内容主要包括以下两部分： 第一部分：NF．KB在胆总管结扎大鼠肝纤维化形成过程 中的动态表达 目的：探讨NF．rd3在实验性大鼠肝纤维化形成过程 中的动态表达。 duct 方法：采用胆总管结扎(bileligation，BDL)大鼠 肝纤维化模型，将80只雄性SpragueDawley大鼠随机分 成假手术组与模型组。模型组分别于结扎后1wk、2wk、 3wk、4wk麻醉动物，假手术组与4wk模型组同批麻醉。 采用HE染色和Masson三色染色确定模型建立情况；用 中文摘要 Westera Blotting方法研究NF—KB蛋白含量在肝纤维化不 同时期的动态变化；用免疫组织化学方法研究NF—KB在 肝纤维化不同时期肝组织中的分布。 结果：QWestem Blotting方法显示正常大鼠肝组织中 即有NF—rd3蛋白表达，随着造模时问的延长表达逐渐上 调，造模4wk时表达最多。造模1～4wk大鼠肝组织中 NF—KB蛋白表达分别增加了17．41％、27．47％、66．03％和 89．87％。②免疫组织化学方法显示纤维化