小鼠胚胎干细胞移植后两种示踪方法的比较-中国医学科学院.pdfVIP

中 国 医 学 科 学 院 学 报 ＡＣＴＡＡＣＡＤＥＭＩＡＥＭＥＤＩＣＩＮＡＥＳＩＮＩＣＡＥ ·论　著 · 小鼠胚胎干细胞移植后两种示踪方法的比较 １，２ ３ ４ １，２ １，２ １，２ 关云谦 ，谢　淑 ，孙静敏 ，邹春林 ，陈　凌 ，张　愚 １首都医科大学　宣武医院　老年病研究所细胞治疗室，北京 １０００５３ ２教育部神经变性病重点实验室，北京 １０００５３ ３国家人类基因组北方研究中心，北京 １００１７６ ４空军第三通信修理所卫生所，北京 １０００７５ 通信作者：陈　凌　电话：０１０电子邮件：ｃｈｌｙｚ３４＠１６３ｃｏｍ 　　摘要：目的　观察小鼠胚胎干细胞 （ＥＳ）移植入大鼠脑内后绿色荧光蛋白 （ＧＦＰ）质粒和Ｔｈｙ１抗体在指示细胞 及细胞分化方面的特点。方法　标记方法一：将ｐＥＧＦＰＮ１质粒转入ＥＳ细胞，连续 １０代抗生素筛选表达 ＧＦＰ的ＧＦＰ ＥＳ，并将ＧＦＰＥＳ移植入活体大鼠脑内。取材后冰冻切片，在荧光显微镜下观察切片上的绿色荧光。标记方法二：直接 移植胚胎干细胞后取材，用特异性抗小鼠Ｔｈｙ１抗体作移植细胞的免疫组织化学染色，荧光显微镜下观察。另外，两种 标记方法均做神经元和胶质细胞的特异抗体神经细胞核抗体 （ＮｅｕＮ）和胶质原纤维酸性蛋白 （ＧＦＡＰ）的免疫组织化学 染色，观察是否与ＧＦＰ或Ｔｈｙ１抗体双标记，以此判定细胞分化情况。结果　ＧＦＰ质粒转化后的ＥＳ细胞团和单细胞均表 达亮绿色的ＧＦＰ，转化效率为３０％；移植２１ｄ后，大鼠脑内存活的移植细胞仍表达ＧＦＰ，但不能和ＮｅｕＮ、ＧＦＡＰ的染色双 标记。大量Ｔｈｙ１阳性的植入细胞和ＮｅｕＮ、ＧＦＡＰ双标记。结论　ＧＦＰ质粒标记胚胎干细胞后移植可以较好地显示移植细 胞，但不能观察细胞分化；而Ｔｈｙ１抗体不仅在显示移植细胞上有较好的效果，还可以准确地标记分化细胞。 关键词：绿色荧光蛋白；胚胎干细胞；分化 中图分类号：Ｑ２３３　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１０００５０３Ｘ（２０１０）０４０４４５０４ ＤＯＩ：１０３８８１／ｊｉｓｓｎ１０００５０３Ｘ２０１００４０１９ ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆＴｗｏＴｒａｃｉｎｇＭｅｔｈｏｄｏｆＴｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄＭｏｕｓｅＥｍｂｒｙｏｎｉｃＳｔｅｍＣｅｌｌ １，２ ３ ４ １，２ １，２ １，２ ＧＵＡＮＹｕｎｑｉａｎ ，ＸＩＥＳｈｕ，ＳＵＮＪｉｎｇｍｉｎ，ＺＯＵＣｈｕｎｌｉｎ ，ＣＨＥＮＬｉｎｇ ，ＺＨＡＮＧＹｕ １ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｅｌｌＴｈｅｒａｐｙ，ＸｕａｎｗｕＨｏｓｐｉｔａｌ，ＣａｐｉｔａｌＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００５３，Ｃｈｉｎａ ２ＫｅｙＬａｂｏｆＮｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅＤｉｓｅａｓｅｓｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎＭｉｎｉｓｔｒｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００５３，Ｃｈｉｎａ ３ＣｈｉｎｅｓｅＮａｔｉｏｎａｌＨｕｍａｎＧｅｎｏｍｅＣｅｎｔｅｒ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００１７６，Ｃｈｉｎａ ４ＨｅａｌｔｈＣｅｎｔｅｒｏｆｔｈｅＴｈｉｒｄＣｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎＤｅｖｉｃｅＲｅｐａｉｒＳｈｏｐｏｆＡｉｒＦｏｒｃｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００７５，