DNA并进行定量PCR分析的通用方法.pdfVIP

文献参考 一种适合于从小鼠鼠尾自动提取基因组DNA 并进行定量PCR 分析的通用方法 摘要 Eppendorf 公司的 epMotion 自动移液系统可以使磁珠法分离小鼠鼠尾基因组DNA 的过程自动化。在本次研究中，试剂使用 的是Invitek 公司的InviMag 组织DNA 试剂盒和Invitrogen 公司的ChargeSwitch 基因组DNA 试剂盒。将epMotion 5070 工 作站与Eppendorf MixMate 混匀仪联合使用，可以实现半自动化的小鼠鼠尾基因组DNA 分离，其中MixMate 可以实现96 孔 深孔板中有效地的磁珠混匀，这种半自动化的系统适用于少量样品的处理。同时，使用 epMotion 5075 LH 大型工作站可以实 现全自动的基因组DNA 分离。 后续的实验证明，使用自动化工作站分离得到的基因组 DNA 适用于敏感的下游应用研究，比如定量 PCR。上述epMotion 工 作站同样参与了所有的定量 PCR 反应制备。实验表明：无论用自己纯化的 DNA ，或 Promega 高纯度的商业化小鼠基因组 DNA 为模板做GAPDH 定量PCR，其结果具有可比性。 简介 常用的从小鼠鼠尾提取基因组 DNA 的方法费时费力。苯酚 这里我们介绍一种使用简便、操作灵活的自动移液系统， / 氯仿会对实验人员造成伤害，而且使用蛋白酶 K 的消化步 epMotion ，通过自动化或半自动化的方法，从小鼠鼠尾中 [1] 提取 DNA 。这种方法具有很高的灵活性，一次可同时处理 骤往往需要几个小时 。目前高通量的用户，如从事基因分 型工作的科研人员，倾向于使用 96 孔硅膜过滤板在自动移 1 - 72 个样品，并且适用于不同的磁珠法分离试剂盒。比如， 液工作站上完成大规模样本的DNA 提取。而中低通量的用户， Invitek 公司 InviMag 组织 DNA 试剂盒和 Invitrogen 公司 或是样本数目经常变化的用户，对于实现 DNA 分离的自动 ChargeSwitch 基因组 DNA 试剂盒。随后的定量 PCR 的移 化则没有多大的选择余地。 液加样工作也由同样高精确性的 epMotion 自动移液工作站 来完成。自动化的加样可以显著地降低由于操作人员的不同 带来的误差以及由于取样失误造成的假阴性或假阳性结果。 材料与方法 自动移液系统 试剂和样品 带有机械手的 Eppendorf epMotion 5075 LH 大型自动移液 Invitek 公司 InviMag 组织 DNA 试剂盒，Invitrogen 公司 工作站，或者 Eppendorf epMotion 5070 小型移液工作站， ChargeSwitch 基因组 DNA 试剂盒。小鼠鼠尾样本（由汉 单道分液器TS 1000-1，单道分液器TS 50-1，8 道分液器 堡 Eppendorf 医学院和 Lilly 公司提供）。小鼠基因组 DNA TM1000-8 ，30 ml 和 100 ml 储液槽支架，可放置 1.5 ml （Promega）。5Prime RealMasterMix，GAPDH 引物 （TIB 微量离心管的 24 孔温控管架，Promega Magnabot 深孔板 Molbiol，柏林）。 磁分离装置。 耗材 仪器设备