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2010年进出境植物检疫学术研讨会论文集
外来人侵种红脂大小蠹CO
I基因分化的研究
姚剑1 张龙娃2 李云飞1 温劲松1 余晓峰1 陈雪娇1 方元炜1
(1．安徽出入境检验检疫局安徽合肥230022；2．安徽农业大学)
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比较其地理种群的同源性，可为了解入侵种的来源
·-——221·-——
2010年进出境植物检瘦学术研讨会论文集
’I’I’AGTr 7一CCCGGTAAA
司]，上下游引物各2“L，ddH：021¨L，模板5¨L。 CC一3’和N一2191(5
ATTAAAATATAAACT
PCR扩增条件：95℃4min后，按94℃，0．5 TC一3’；弓I物Ⅱ：S1718(5
PiGGAGGAT丌’GGAAATTGA7ITAG’ITCC一3
min；58oC，0．5 min进行40个循环，72
min；72℃，l
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℃保温4min。 ，和A3018(5’一TCCCTAATC
本研究所用2对引物，由上海生工合成。引物 棚’A一3，‘51。
7一GGAGGATTTGGAAATTGA
I：J一1718(5
表1 供试红脂大小蠹信息
1．4测序 22位点，除Kelley测序结果为N外，红脂大小蠹均
扩增结束后取5 PCR反应产物，以1×TAE
p,L 为C，而其他大小蠹则表现为T。这三个位点的红
缓冲液、1．5％琼脂糖凝胶电泳，附带Marker检测。脂大小蠹种内一致(视N=C)，而其余各种变化不
取扩增成功的产物约500ng进行Bigdye测序反一，但与红脂大小蠹均不相同。不同引物扩增结果
应，并用ABI3700DNA自动测序仪分析获取DNA一致，可视为红脂大小蠹种的特异位点。同时比较
n
序列结果(上海生工)，所有序列在GenBank登录
(GQ495096一GQ495128，附录1)。异位点中，两者间有20个碱基差异。利用Mega4．1
1．5序列分析 将引入的序列生成的进化树(图1)。与DNAMAN6
将扩增产物测序结果引入DNAMAN6进行分 生成的树基本一致，所有红脂大小蠹的基因序列明
析，与Ca
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