FcRn在猪小肠上皮细胞系中的表达及其介导IgG胞转作用的研究.pdfVIP

猪的传染病 外周血单核细胞释放肿瘤坏死因子，是该病原的重要特异性膜蛋白，以此蛋白基因为靶基因可特异性 检测该病原。本试验建立的猪鼻支原体p37 基因序列设计的 2 对特异性引物，经 PCR 扩增出约 628b p 、346bp 2 段基因片段，测序结果表明，该基因为目的基因片段。成功建立了巢式 PCR 检测猪鼻支 原体的方法。 Makhanon 等[6]通过比较分离培养方法和普通 PCR 方法对 270 份临床肺组织样品中猪鼻支原体的 检测，结果表明，分离培养法的检出率为 18.15% （49/270 ），而常规单套 16SrDNA PCR 方法的检出 率为 5.19% （14/270）。本试验结果表明，猪鼻支原体P37 巢式 PCR 检测方法的敏感度为 3.01×10-4mg 4 /L ，而常规单套PCR 的敏感度仅为 3.01 mg/L 。巢式PCR 的敏感性是普通PCR 的 10 倍，巢式 PCR 较常规 PCR 的敏感性大大提高。通过对 41 份猪场临床样品肺组织的检测，常规单套 PCR 的检出率 为 29.3% （14/41），而巢式 PCR 的检出率为 82.9% （34/41 ）。试验结果表明，所建立的猪鼻支原体巢 式 PCR 检测方法具有较好的特异性、敏感性及准确性，可以用于临床样品的检测，是对猪鼻支原体 分子生物学检测方法的有益补充。但巢式 PCR 的敏感性较高，易产生假阳性。因此，在操作过程中要 严格控制污染。解决污染的问题可以通过设置分区，分别设立标本制备区、PCR 扩增区、产物分析区 和产物处理区；设置合理的阴、阳性对照，如将已知含量的猪鼻支原体培养物加入到被检组织及相应 的健康组织设立阳性对照和阴性对照；通过加入内控引物进行监测等。通过上述途径和方法，确保P CR 检测结果的稳定可靠。 参考文献（略） FcRn 在猪小肠上皮细胞系中的表达及其介导 IgG 胞转作用的研究 1 1,2 1,2 1,2 郭锦玥 ，李自力 ，何启盖 ，毕丁仁 （1. 华中农业大学动物医学院；2. 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室，湖北武汉，430070 ） 摘 要 新生儿 Fc 受体（neonatal Fc receptor, FcRn ）是跨越黏膜屏障转运IgG 的唯一受体。本研究从猪小肠上皮细胞 系（IPEC-J2 ）提取总RNA ，采用RT-PCR 扩增出猪 FcRn α 链两个大小不同的片段（FcRn-L, FcRn-S ），测序结果表明 FcRn-L 大小为 1308bp，FcRn-S 大小为 1032bp，FcRn-S 与 FcRn-L 相比，在 FcRn 的 α 2 区域缺失了276 个碱基，即 92 个氨基酸。进一步通过 Western-blot 检测了猪 FcRn 在猪小肠上皮细胞系 IPEC-J2 中的表达，结果显示在约 40KDa 处有一条特异性条带，与 FcRn-L 蛋白大小一致。在此基础上建立了猪 FcRn 介导 IgG 胞转作用的 IPEC-J2 细胞模型， 结果表明猪 FcRn 能跨越极化的IPEC-J2 细胞双向转运 IgG 。这为下一步开展猪FcRn 跨越肠黏膜上皮屏障转运 IgG 的 作用机制及 IgG 在猪肠道黏膜免疫中的作用研究奠定了基础。 关键词 新生儿 Fc 受体（FcRn ）；IPEC-J2 ；IgG ；胞转作用 机体 95% 以上的感染发生在黏膜或由黏膜入侵机体，黏膜及黏膜免疫在机体抗感染免疫中发挥着 重要的作用。在黏膜表面的抗体主要以分泌性免疫球蛋白 A （S-IgA）为主。S-IgA 是通过多聚免疫球 蛋白受体（pIgR ）跨越极化的黏膜上皮细胞转运进入管腔中的。最新的研究表明在黏膜分泌物中也含 有一定量的 IgG ，主要由新生儿Fc 受体（neonatal Fc receptor, FcRn ）跨越极化的黏膜上皮细胞转运 而来，并在黏膜免疫中起着十分重要的作用[1] 。Dickinson 等研究表明人肠道上皮细胞系（T84 ）表达 FcRn ，并能通过胞转作用（transcytosis ）跨越极化的上皮细胞双向转运I