中国南部近海环境中TCBS菌群与弧菌相关性的研究.pdfVIP

★第五届青年海洋科学研讨会论文集★ 中国南部近海环境中TCBS菌群与弧菌相关性 的研究 李和阳卜，陈明霞1t3，郑天凌2，郑森林1，陈彬1 (1．国家海洋局第三海洋研究所，福建厦门361005；2．厦门大学生命科学学院，福建厦门361005； 3．华侨火学化工学院，福建厦门361021) 多样性分析)及16S rDNA序列分析等方法对深圳海域水体和九龙江河12沉积物中弧菌数量 分布进行研究。结果表明TCBS菌群数中弧菌所占的比例因不同采样地点、不同季节而呈现 较大差异。深圳西海域及九龙江口上游盐度较低(低于11)的区域，TCBS菌群中弧菌所占 的比例为O％，TCBS菌群数与弧菌总数不相关；河口下游盐度相对较高的区域，弧菌占TCBS 菌群数的6％～92％，TCBS菌群数与弧菌总数不相关或相关性不大；高盐度的海水区域弧 监测过程中利用TCBS培养基检测海洋弧菌数量时，应该通过分子鉴定或生理生化鉴定方法 进行验证，以保证数据的科学性。 关键词：海洋微生物；TCBS菌群；弧菌总数；环境监测；深圳海域；九龙江口 弧菌的特异性筛选，绝大多数的致病性弧菌在这种培养基上生长良好。培养基中的胆酸钠、 牛胆粉、硫代硫酸钠和柠檬酸钠及较高的pH值可抑制革兰氏阳性菌和大肠菌群，配置好的 TCBS琼脂平板相比于通用性的2216E或LB琼脂平板不容易染上杂菌。当然，除了弧茵属 (1eibrio)Pl，还有其他一些细菌类群也可生长于TCBS培养基上，比如已报道的发光杆菌属 由此可见TCBS培养基并不是特异性非常强的选择培养基【l01。目前，弧菌数量监测尚无国 家标准，许多学者在环境细菌学监测过程中经常直接将TCBS菌群数等同于弧菌数[11-19】， 这显然与实际情况并不完全相符。本研究通过传统分离培养方法与分子生物学方法相结合， 探讨不同样品TCBS菌群中弧菌所占的比例，分析二者之间的相关性，指出环境监测方法中 的不足并提出相关的改进措施。 收稿日期：2010．09-08 基金项目：国家自然科学基金资助项目(410061 17)；海洋公益性行业科研专项经费项目f200805064)；福 基金项目(海三科2005003；2005007)；海洋三所基本科研业务费专项资助项目(海三科2007021)。 作者简介：陈明霞(1980～)，女，博士研究生；E．mail：chenmxl257@163．com 通讯作者：李和阳(1978～)，男，副研究员；E-mail：heyangli@126．com 513 一、海洋调查与研究 l材料与方法 1．1样品采集 调查范围包括深圳海域和九龙江河口流域，采样站位如图1所示。深圳海域10个采样站 位是根据深圳环境保护监测中心的长期环境监测而设定，位于22．240～22．70。N，113．60。～ l14．80E。 海域， 年4月(春季)和2008年9月(秋季)采集。水深10in以上(东部海域)的站位采集表层 每个水层采集500cIn3水样。样品于4。C保存，带回实验室后(不超过48h)立即进行菌株分 离培养并计数。 17．800～11 8．1l。E，采集时间为 九龙江河口区共设10个站位，位于24．390～24．470N，l h 2009年11月(秋季)。采集表层沉积物，于冰上放置，带回实验室后于40c存放并于72 内分离培养。 1．2TCBS菌株的分离培养和计数 每个水样分别取5mm3(用50mm3～100姗3灭菌蒸馏水稀释)、50n瑚3币H200ITtm3或 100 111ln3)直接涂布于TCBS琼脂平板上，于26±I。C培养26+2h，并对典型菌落(蓝绿色、 绿色和黄色)进行计数。称取0．5～lg沉积物样品，用事先灭菌好的蒸馏水将样品稀释5 倍(质量比)，充分混匀，静置片刻让土壤颗粒沉淀。取200mm3上层水溶液于TCBS 琼脂平板上，用涂布棒涂布至水样被完全吸收(操作时间不超过10min)。于26士1℃培 养箱内培养2