壳寡糖及其配合物促胰岛细胞增殖、胰岛素分泌及调节餐后血糖作用的研究.pdfVIP

间接降解作用，二是直接水解血栓纤维蛋白。 壳寡糖及其配合物促胰岛细胞增殖、胰岛素分泌及调 节餐后血糖作用的研究3 刘冰扣刘万顺”韩宝芹”陈列欢“‘ (’中国检验检疫科学研究院北京100025，”中国海洋大学生命学院青岛 266003，“淮海工学院海洋学院连云港222005) 摘要 目的研究壳寡糖及其铬、钒、硒配合物对胰岛B细胞系NIT一1的促增殖及胰岛素分 泌作用，并进一步探讨在体内壳寡糖及其配合物降低链脲佐菌素诱导的糖尿病人鼠的餐后 2h血糖的作用。方法通过配位反应制备得到水溶性壳寡糖及其配合物，在细胞水平上，通 过形态学观察、MTT比色法、放射免疫等方法研究壳寡糖及其配合物对于胰岛B细胞系NIT —l细胞的增殖及促胰岛素分泌作用：体内实验，通过一般状态观察、餐后2h血糖、尿糖、 糖耐量测定研究了壳寡糖及其配合物对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠降低餐后2h血糖和改 善葡萄糖耐量的作用。结果壳寡糖及其配合物对于胰岛B细胞体外增殖具有明显的促进作用 并可以显著促进胰岛B细胞的胰岛素分泌。壳寡糖在体内能有效改善糖尿病大鼠的体重减 轻、多饮、多食等症状，降低餐后2h血糖值和尿糖，改善葡萄糖耐量。 关键词 壳寡糖糖尿病大鼠2h血糖糖耐量试验胰岛细胞链脲佐菌素 0引言 糖尿病(Diabetesmellitus，DM)是一种常见的内分泌代谢病…，具有遗传倾向，是由 于胰岛素绝对或相对不足所致的血糖及尿糖增高为主要特征的并导致糖、蛋白和脂肪代谢障 150 碍全身慢性代谢异常综合症，常伴发心脑血管、肾、眼及神经等多种并发症，危害性大。据 WHO报告，糖尿病已成为世界上继恶性肿瘤、心脑血管病后第3位严重威胁人类健康的慢性 于水，可被人体、动物及植物机体吸收利用。研究发现，壳寡糖不仅具有和壳聚糖一些相似 的性质，而且一些生理活性或功能性质更加显著，如提高机体免疫、抗肿瘤、降血脂、抗 感染、防治病原生物感染、作为植物调节物质，作为促进双歧杆菌生长因子的研究等浯。其 降血糖作用国内外已有报道，但对与糖尿病有益的元素配位的壳寡糖的降血糖作用，尚未见 报道。本实验以转基因小鼠的胰岛6细胞系NIT—l细胞株为研究对象，从细胞水平研究了 壳寡糖及其配合物促胰岛B细胞增殖和胰岛素分泌的作用。并以全雄性Wistar大鼠为实验 动物．对链脲佐菌素诱导的糖尿病(蹦)大鼠定量灌胃壳寡糖水溶液，对其60d内餐后2h 血糖，60d后葡萄糖耐量的改变状况做了一些初步探讨。 1材料与方法 1．1实验材料 192 COS分子量为1200，钒、硒、铬含量分别为579、1835、l ppm，本实验室制备)，用于 la 细胞培养时用相应培养基溶解，O．22m过滤除菌，并稀释到相应浓度；NIT—l细胞株(转基 因小鼠胰岛B细胞系，中国海洋大学药物所)；封闭群纯系雄性Wistar大鼠60只(200±209， 二级标准，青岛市立医院动物试验中心，SCXK(鲁 1．2实验试剂及仪器 试剂盒(南京建成)；尿糖试纸(广州白云山)；酶标仪(353，ThermoLabsystems)；紫外可 见分光光度计(TU一1800，北京普析通用)；放射免疫Y计数器(FMJ一182，上海原子核研究所)； 红外光谱(NICoLET5700美国) 1．3实验方法 1．3．I壳寡糖配合物的制备、纯化及其结构表征 lO％的壳寡糖溶液(D．D．=90％，Mw=1200Da)，按一定摩尔比加入CrCI。、VOSOt、Na2Se03 溶液，分别在45℃，30℃，45。C。F反应6h。乙醇／丙酮(1：1)沉淀，无水乙醇洗涤，40C G一25分离纯化，收集主峰后 真空干燥。称取适量配合物样品，溶解于三蒸水中，Sephadex 冷冻干燥，得到配合物纯品SUGAR-KS一802柱分析纯度，并测定其分子量、脱乙酰度及铬、钒、 lSl 了壳寡糖配合物的结合形式． 1．3．2壳寡糖及其配合物在体外促胰岛细胞增殖及胰岛素分泌的作用 (1)壳寡糖及其配合物对胰岛13细胞