口服轮状病毒活疫苗接种无菌兔的免疫原性研究.pdfVIP

口服轮状病毒活疫苗接种无菌兔的免疫原性研究 李东1，国泰2，刘悦越2，刘艳2，张向颖2，谷金莲2，祁自柏2，王军志2，杨晓明1 (1．武汉生物制品研究所，武汉430060；2．中国药品生物制品检定所，北京100050) 摘要：目的探讨单价羊株轮状病毒活疫苗(LLR)在无菌兔体内的的免疫原性效果，建立研究人RV疫苗保护性 免疫机制的新型动物模型。方法采用无菌兔傲为实验模型，随机将无菌兔分为实验组和空白对照组，实验组接 种uR疫苗。利用ELISA检测接种LLR后无菌兔血清中IgA和IgC滴度及便样中RV抗原；利用流式细胞仪检测 兔外周血CD4／CD8比值变化；免疫组化法检测小肠组织中轮状病毒VP6蛋白来观察轮状病毒疫苗是否在小肠繁 殖一感染小肠。结果LLR接种后，无菌兔体内产生IgA，外周血CD4／CD8比值降低，u丑能在无菌兔小肠绒毛膜 上皮细胞内复制，但小肠组织无病理学改变。无菌兔无腹泻发生。结论在无菌兔体内，um能诱导特异性体液 免疫和细胞免疫，U且在无菌兔体内免疫效果良好。无菌兔可做为研究人RV疫苗保护性免疫机制的动物模型。 关键词：LLR；免疫；无菌兔 轮状病毒(Rotavirus，Rv)是引起儿童重症腹毒特异性IgA和IgGELISA检测试剂盒由中国药品 泻的最常见病原之一…。据估计，仅2004年约生物制品检定所疫苗二室研制和提供；FITC标记的 527，000儿童死于RV感染【2．3】，并且主要发生在发兔抗鼠CD4和CD8单抗购自ABDSerotee公司； 展中国家。RV感染严重威胁儿童健康，但临床上 尚无有效的抗病毒药物治疗RV感染，因此及时预 FACSCalibur。 防RV感染尤显重要，目前已批准上市的RV疫苗4疫苗接种 采用口服灌药。兔在实验室适应两天。口服疫 有三种HJ：单价人减毒活疫苗(Rotarix)、五价牛一 人重配株疫苗(RotaTeq)和G10型单价羊株减毒活 l 疫苗(LLR)。接种RV疫苗可有效预防严重轮状病后灌苗3ml。对照组兔仅服用NaHC03ml。 毒肠胃炎，减少因轮状病毒肠胃炎引起的住院机会。 5样品收集及处理 但RV疫苗预防RV感染的作用及免疫机制等问题 采血：免疫前和免疫后第8d、15d、22d、29d分别 仍然不清。因此本研究首次应用无菌兔为实验动物 进行兔心脏采血。便样收集：兔子免疫前收集便样 模型，观察RV疫苗的保护效力，探讨RV疫苗作用一次，免疫疫苗后与第一至第15d每天收集便样。 机制，为评价新型RV疫苗免疫效力提供基础数据。 小肠采集：动物处死后即刻解剖取十二指肠，生理盐 水清洗后放于0．4％甲醛中保存。 材料与方法 6 EJ．,ISA检测兔血清中轮状病毒特异性Igt；和IgA l疫苗 羊株口服轮状病毒减毒活疫苗，兰州生物制品 品用样品稀释液稀释10倍；将接种疫苗前和接种 研究所生产，批号为070304；有效期 lml疫苗所含活病毒不低于5．519PFU／ml或lgC．中，501_L1／孔，并设阴性对照2孔、阳性对照2孔及空 CID∞。 白孔，50∥孔。37℃温育lh；加酶辣根过氧化物酶 2动物 标记羊抗兔IgG抗体或IgA抗体，50∥孔，37℃温 无菌兔由中国药品生物制品检定所动物中心提 育lh，PBST洗涤5次后加TMB显色，酶表仪测定反 供。体重约为200-2309，兔龄，35d，共9只随机分 为两组。实验组7只，空白对照组2只。 3试剂与仪器 为阳转。 轮状病毒抗原ELISA检测试剂盒和轮状病毒7流式细胞术检测外周血中CD4／CD8比值 VP6单克隆抗体购自兰州生物制品研究所；轮状病 将100止抗凝的外周血加入5ml流式管底；向