口蹄疫病毒VP1基因在新型疫苗研究中的应用.pdfVIP

第十三次学术研讨会会议论文集 口蹄疫病毒VPl基因在新型疫苗研究中的应用 袭莹鲁会军金宁一 (军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130062) 1前言 口蹄疫(Foot—aIld-Moutll Disease，FMD)又称口疮热(aphthousfever)，是由口蹄疫病毒 (Foot一锄d—Mouth 性、热性、高度接触性人兽共患传染病…。口蹄疫传播途径多，传染性强，曾多次在一些国家或地 区发生大流行，严重威胁畜牧业发展，被世界动物卫生组织(world ofaIlimal orgaIlizationhealtll，om) 和Asia I型(亚洲I型)7个血清型，八十多个亚型。由于FMDV血清型多、血清型间无交叉免疫 现象，且有遗传多变的特性，故给FMD的防制带来了很大的困难。 口蹄疫病毒是小RNA病毒科口蹄疫病毒属的成员，为单股正链RNA，全长约8500个核苷酸，只 有一个大的开放阅读框架，编码一个大的聚合蛋白，经一系列蛋白酶特异裂解为病毒结构蛋白和非 共4个结构蛋白单位。VPl蛋白大部分暴露在病毒的表面，是决定病毒抗原性的主要成分。VPl的第 原性的高变区lzl。 因此ⅣDV VPl基因在基因分型、诊断、检测及疫苗研制中发挥着重要作用‘31。 因此，VPl基因一直是口蹄疫病毒分子生物学研究领域中的热点。 2口蹄疫新型疫苗 FMD灭活疫苗和弱毒疫苗等常规疫苗都具有良好的免疫原性，在预防和控制口蹄疫的过程中发 挥着重大作用，但由于病毒毒力返强、病毒灭活不彻底、活病毒逃逸等不安全因素也曾导致世界上 一些地区FMD的暴发。这些问题促使科研人员寻求一种更加安全有效的疫苗。近年来，随着分子生 物学的飞速发展，口蹄疫新型疫苗相继问世，其中含有FMDv vPl基因的新型疫苗如基因工程亚单 位疫苗、可饲(食)疫苗、合成肽疫苗、基因缺失疫苗、活载体疫苗、核酸疫苗等也不断涌现，并 取得了一些喜人的进展。 2．1基因工程亚单位疫苗 基因工程亚单位疫苗是指采用基因工程手段制备病原体亚单位成份，由于亚单位疫苗只含有病 原体的一部分，不含有核酸，所以不会引起病原体所导致的疾病，其安全性大大提高。 Kupper等一1成功克隆了FMDVVPl基因，将其插入到原核表达载体PL启动子的下游，实现vPl 基因的原核表达，并通过间接ELISA和放射免疫试验证实其表达产物具有抗原性，从而为FMDV 基因工程亚单位疫苗的研制提供了理论依据。Kield等应用重组DNA技术在大肠杆菌中表达了口蹄 疫病毒主要保护性抗原VPl。以这种融合蛋白制备的实验疫苗，在牛和猪中均可诱导中和抗体产生。 使用152¨g的融合蛋白重复接种，牛可抗A型口蹄疫病毒的攻击感染。 2．2可饲(食)疫苗 可饲(食)疫苗是利用脓杆菌或基因枪等技术，将具有免疫原性的基因导入植物细胞中，获得 表达免疫原性蛋白的植株，通过饲喂动物使其获得对相应病原的免疫抵抗能力。 刚D转基因植物可饲疫苗是研究较早，并且效果较好的例子之一。早在1998年，camllo掣51 用FMDV的主要保护性抗原基因VPl获得了转基因拟南芥，用叶浸提物免疫小鼠，可诱导产生特异 性抗体，所有免疫的小鼠都能抵抗FMDV强毒半数致死量的攻击，这是有关转基因植物表达的病毒 抗原使免疫动物全部获得保护的首篇报道，而且一个免疫剂量仅为25～50mg叶片。1999年 w培domvina等旧J又利用苜蓿作为受体材料，成功获得了转基因苜蓿，以15～20mg剂量免疫小鼠， 免疫鼠能100％抵抗强毒的攻击。国内也有学者正在研究利用转基凶植物来表达重组蛋白，并已取得 初步成效，如2006年中国农科院的Li Y等【7J用生物学方法将FMDvvPl基凶转入烟草叶绿体中， D 经试验表明，VPl基因与叶绿体融为一体，实现了高效表达。2007年HeM等‘踟将FMDvvPl基