heNOS基因修饰外周血内皮祖细胞及其磁探针标记后体外磁共振成像实验的研究.pdfVIP

heNOS 基因修饰外周血内皮祖细胞及其磁探针标记 后体外磁共振成像的实验研究1 1 1,* 1 1 1 1 2 2 聂芳 ，滕皋军 ，麦筱莉 ，陈骏 ，石红建 ，曹爱红 ，葛玉卿 ，张宇 ， 顾宁 2 1. 东南大学附属中大医院放射科，江苏省分子影像与功能影像实验室，南京（210009 ） 2. 东南大学生物科学与医学工程系，南京（210009 ） E-mail ：gjteng@ 摘 要：目的heNOS 基因体外修饰兔外周血来源的内皮祖细胞（endothelial progenitor cells ，EPCs ）后，应用纳米磁探针三氧化二铁(Fe O )-精氨酸(arginine)复合物体外标记基 2 3 因修饰的EPCs ，磁共振（MR ）进行标记细胞成像。方法 制备Fe O -arginine 复合物。 2 3 TM 分离兔外周血单个核细胞，贴壁法筛选出EPCs ，传代培养，用脂质体Lipofectamine 2000 体外转染人内皮型一氧化氮合酶（heNOS ）基因至EPCs ，转染后48h 对基因修饰 EPCs 进行磁探针标记，普鲁士蓝染色显示细胞内铁，Western Blot 检测heNOS 基因表达情况， 四氮噻唑蓝（MTT ）比色试验评价磁探针标记基因修饰EPCs 后对细胞生长状况的影响， 流式细胞分析检测标记、未标记细胞的细胞凋亡，应用MR 的T WI 、T WI 、T *WI 三个 1 2 2 序列进行细胞群成像。结果 普鲁士蓝染色可见铁颗粒位于细胞质内，标记率与标记的未 修饰基因组EPCs 相似，都接近 100 ％；MTT 比色试验示Fe O -arginine 标记后第3d、4d 、 2 3 5d ，标记的基因修饰细胞组、未修饰基因细胞组的光吸收值与未标记者比较，差异无统 计学意义；流式细胞分析结果显示Fe O -arginine 标记后细胞凋亡与未标记细胞间差异无 2 3 统计学意义。磁共振成像（MRI ）显示标记的基因修饰细胞群信号强度的变化与标记的 未修饰基因细胞相似，两者之间无统计学差异，且两者较未标记细胞群信号均降低，以 T2 *WI 的信号强度变化率最大，标记后7d 的信号强度变化率均较标记后 1d 者下降。结 论 使用脂质体可以成功地将外源 heNOS 基因转染进兔外周血 EPCs 中并在其中有效表 达，Fe O -arginine 可以有效标记heNOS 基因修饰的EPCs ，其对细胞的活力、增殖等生 2 3 物学特性无明显影响。临床应用型1.5T MR 可在体外进行标记细胞群成像，间接反映干 细胞的数量和分裂增殖状态。 关键词：内皮祖细胞；基因转染；磁共振成像；标记 1997 年Asahara 等[1]首次从外周血中分离得到内皮祖细胞(endothelial progenitor cells， EPCs) 后，围绕 EPCs 的研究便迅速展开和深入。内皮祖细胞是能分化为内皮细胞 (endothelial cells，ECs) 的前体细胞，在内皮修复和血管新生中起重要作用[2-3] 。因此，它 是转基因治疗的理想细胞。近年来，基因修饰 EPCs 移植在以往 EPCs 移植治疗心血管疾 病的研究基础上得