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2017-09-04 发布于重庆
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实时定量PCR 实验技术服务实时定量PCR 实验技术服务实实时时定定量量PPCCRR 实实验验技技术术服服务务我公司提供两种检测方法：即染料法和探针法 1. 染料法（SYBR Green I） SYBR Green I 是一种结合于小沟中的双链 DNA 结合染料。与双链 DNA 结合后，其荧光大大增强。图 1. SYBR GREEN I 工作原理由熔解曲线来分析产物的均一性有助于分析由 SYBR Green I 得到的定量结果。图2：实时荧光定量PCR(SYBR Green I法)熔解曲线 2．TaqMan 探针法 TaqMan 探针是一种寡核苷酸探针，它的荧光与目的序列的扩增相关。它与目标序列上游引物和下游引物之间的序列配对。荧光基团连接在探针的 5’ 末端，而淬灭剂则在 3’ 末端。当完整的探针与目标序列配对时，荧光基团发射的荧光因与 3’ 端的淬灭剂接近而被淬灭。但在进行延伸反应时，聚合酶的 5’ 外切酶活性将探针进行酶切，使得荧光基团与淬灭剂分离。随着扩增循环数的增加，释放出来的荧光基团不断积累。因此荧光强度与扩增产物的数量呈正比关系。相对于染料法,Taqman探针法具有更高的特异性和准确性。图 3. Taqman 探针工作原理实时荧光定量PCR服务操作流程: · 客户提供目的基因名称、序列或GeneBank Id号 · 我公司设计并合成PCR引物及Taqman探针(探针法） · Real-time PCR实验 · 提供实验报告(实验过程、实验条件、使用的仪器及试剂、标准品扩增曲线、标准曲线、样品扩增曲线、熔解曲线、Ct值及拷贝数)