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考点二 动物细胞融合与单克隆抗体的制备 一、动物细胞融合 1.原理:细胞膜的流动性。 2.诱导融合的因素:聚乙二醇(PEG)、灭活的病毒、电激等。 【特别提醒】 灭活是指用物理或化学方法使病毒失去感染能力,但是并不破坏这些病原体的抗原结构。 3.意义:最重要的用途是制备单克隆抗体。 二、单克隆抗体的制备 1.过程 2.单克隆抗体的主要优点:特异性强、灵敏度高,并可大量制备。 三、动物细胞融合与植物体细胞杂交的不同 项目 动物细胞融合 植物体细胞杂交 原理 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性及细胞的全能性 诱导 手段 除物理、化学方法外还可用灭活的病毒 物理、化学方法 酶 胰蛋白酶或胶原蛋白酶 纤维素酶和果胶酶 结果 杂种细胞群 杂种植株 应用 制备单克隆抗体等 培育白菜—甘蓝等 【案例2】 (2009·山东理综)人类在预防与诊疗传染性疾病过程中,经常使用疫苗和抗体。已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒,该病毒表面的A蛋白为主要抗原,其疫苗生产和抗体制备的流程之一如下图所示: 请回答: (1)过程①代表的是________。 (2)过程②构建A基因表达载体时,必须使用__和___两种工具酶。 (3)过程③采用的实验技术是____________,获得的X是_。 (4)对健康人进行该传染病免疫预防时,可选用图中基因工程生产的 _______所制备的疫苗。对该传染病疑似患者确诊时,可从疑似患者体内分离病毒,与已知病毒进行 ________比较;或用图中的__________进行特异性结合检测。 【解析】 本题用图展示了疫苗的生产和单克隆抗体的制备过程,考察了中心法则、基因工程和动物细胞工程等现代 生物技术。 (1)中心法则中,对于少数的以RNA为遗传物质的病毒,其遗传信息的传递过程需要补充的过程有RNA的逆转录和RNA的复制过程,图中过程①代表的是逆转录的过程。(2)基因工程的步骤是:目的基因的获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞和目的基因的检测与鉴定。其中基因表达载体的构建中需要限制酶来切割以获取目的基因,同时需要相同的限制酶切割运载体以获取与目的基因相同的黏性末端,再通过DNA连接酶连接目的基因和运载体。(3)过程③是将瘤细胞与B淋巴细胞融合的过程,获得的叫杂交瘤细胞,其具备了瘤细胞的无限增殖的特性和B淋巴细胞的产生抗体的特性,从而制备单克隆抗体。(4)本题考查了免疫预防的操作过程,以及欲确诊 疑似患者而采取的方法。本题中提示该RNA病毒表面的A蛋白为主要的抗原,故而可选用通过基因工程生产的A蛋白制备疫苗;确诊时为判断该病毒是否为题目中的RNA病毒,可以进行核酸序列的对比,临床上也可用抗体检测法检查人体是否存在抗病毒的抗体,如果存在抗病毒的抗体,则说明该个体曾经感染相应病毒,抗体检测试剂为抗A蛋白的单克隆抗体。 【答案】 (1)逆(反)转录 (2)限制性核酸内切酶(限制酶、限制性内切酶) DNA连接酶(两空可以互换) (3)细胞融合 杂交瘤细胞 (4)A蛋白 核酸(基因)序列 抗A蛋白的单克隆抗体 【即时巩固2】 (2007·上海)下图表示用生物工程制备人抗A抗体的过程,请回答下列问题。 (1)人的红细胞膜表面有被称为凝集原的特异______;从免疫学角度看,这种凝集原是________。 (2)图中细胞1是小鼠体内注入人A型血红细胞后而获得的________细胞,这种细胞具有产生________的特点,但难以在 体外培养。甲培养皿中培养的细胞2,是从患骨髓瘤的小鼠体内获取的骨髓瘤细胞,这种细胞在体外培养时能________,但不会产生抗体。 (3)为了充分发挥上述两种细胞各自的特点,经特殊处理,在促细胞融合因子的作用下,使两种细胞发生融合,形成图中的细胞3,这种细胞称为_______。把它在乙培养皿中进行培养,则能产生大量的细胞群,这种方法称为________。 (4)过程①的主要目的是____________________。通过过程②或③的培养方法能产生大量______抗体。 【解析】 考查了单克隆抗体制备的有关知识。抗原注入小鼠体内可获得能产生抗体的免疫B细胞,与骨髓瘤细胞结合 后得到的杂交瘤细胞,可具备既能产生抗体又能在体外培养条件下大量增殖的特点。在培养过程中需要用抗原-抗体检测筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞,再进行克隆化培养获得单克隆抗体。 【答案】 (1)糖蛋白 抗原 (2)免疫B淋巴 单一的抗A抗体(或单一的特异性抗体) 快速大量增殖 (3)杂交瘤细胞 细胞克隆技术 (4)筛选出能产生单一抗A抗体的杂交瘤细胞 抗A单克隆 知识研读 (对应学生用书P161) 专题2 细胞工程 植物细胞工程 植物的组织培养。 课程标准 (
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