高效液相色谱基础.ppt

液 相 色 谱 紫 外 检 测 器 紫外光源的获得 液 相 色 谱 紫 外 检 测 器 液 相 紫 外 检 测 器 单 色 器 介 绍 液 相 色 谱 紫 外 检 测 器 紫 外 检 测 器 电 路 框 图 液 相 色 谱 紫 外 检 测 器 紫外检测器的分析结果之一：色谱数据图 液 相 色 谱 紫 外 检 测 器 紫外检测器的分析结果之二：光谱数据图 液 相 色 谱 紫 外 检 测 器 对 检 测 器 的 要 求 高灵敏度 可重现的设置 合适的带宽 快速或可变的时间常数 宽的线性响应范围 容易使用及保养 具自我诊断功能 符合GLP规范 液 相 色 谱 紫 外 检 测 器 衡 量 检 测 器 的 指 标 噪音：没有样品时检测器的最大输出信号 漂移：检测器在一段时间内响应值的变化 重现性：检测器有关分析的参数的稳定性 线性动态范围：最大线性响应与最小检出限之比 最小检测限：样品产生两倍或三倍于噪音信号的浓度 信噪比 注意：最小检测限不是一个单纯的检测器指标，它实际上是评比 整个色谱系统的指标，包括了色谱系统、分离机理、色谱柱在内 的综合性指标，信噪比亦是如此 * 高效液相色谱仪基础 福立分析仪器有限公司 液相色谱基础 常见的分离方式 化学物质成分的定性和定量分析离不开分离，我们常见 的分离方式有以下几种：蒸馏、离心、电泳、过滤、色谱等 ，其中色谱分离是最重要和有效的手段。 色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的 各组分经过固定相(stationary phase)时，由于与固定相发 生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强 弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流 出。又称为色层法、层析法。 液相色谱基础 本世纪初，俄国科学家茨维特（M.S.Tswett）提出 经典液相色谱法后，色谱分析法取得了迅速的发展， 30～40年代发展了柱分配色谱、纸色谱， 50年代发展了气相色谱法、薄层色谱法， 60年代发展了凝胶色谱法、高效液相色 谱法70年代发展了高效毛细柱气相色谱 法，80年代发展了毛细管电泳、电色谱， 90年代出现了光色谱。 液相色谱基础 茨维特实验的原形 ×1906年茨维特用右边图示的实验装置使用液 体淋洗的办法实现了多种物质的分离从而确立 了色谱分析法。从此这个实验方法就成为： 经典液相色谱法 时至今日这种方法还被广泛地应用着。 ×随着科学技术的发展，科学工作者改进了液 相色谱柱的填料，从而就出现了高效液相色谱 分析。 ×几种英文缩写的解释： HPLC－High Performance Liquid Chromatograghy HPLC－High Pressure Luquid Chromatograghy HSLC－High Speed Liquid Chromatograghy HRLC－High Resolution Liquid Chromatograghy 液相色谱基础 HPLC的特点和优点 HPLC有以下特点： ★高压-压力可达15～30Mpa。 ★高速-流速为0.1～10.0 ml/min。 ★高效-可达每米5000塔板以上。在一根柱中同时分离成份可达100种。 ★高灵敏度-紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品少。HPLC与经典液相色谱相比有以下优点： ★速度快-通常分析一个样品在15～30 min，有些样品甚至在5 min内 即可完成。 ★分辨率高-可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果。 ★灵敏度高-紫外检测器可达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg。 ★柱子可反复使用-用一根色谱柱可分离不同的化合物。 ★样品量少，容易回收-样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组 分或做制备。 液相色谱基础 高效液相色谱法与经典液相色谱法的比较 高效液相色谱法 经典液相色谱法 柱 长： 10～25cm 10～200cm 口 径： 2～10mm 10～50mm 粒 度： 5～50um（2500目～300目） 75～600um（200目～30目） 柱 压 力： 2～20MPa