发酵液中红霉素含量测定.docVIP

发酵液中红霉素的含量测定 张宇，龚文静，沈以凌，苗秀珍 (南京工业大学生物与制药工程学院，江苏 南京 210009) 摘要：建立了红霉素的含量测定方法—初筛用紫外分光光度法（UV），复筛用高效液相色谱法（HPLC）。UV法确定磷酸浓度10mol/L，反应温度80℃，反应时间3min，测定波长485nm；HPLC法确定柱温50℃，波长210nm。此种方法针对性好，适用于大批量的红霉素发酵液的检测。 关键词：红霉素；发酵液；紫外分光光度法；高效液相色谱法 中图分类号： Q939.97 文献标志码：A 文章编号： Determination of Erythromycin in Fermentation Liquor ZHANG Yu，GONG Wenjing，SHEN Yiling， MIAO Xiuzhen （1.Nanjing University of Technology, Nanjing 210009, China） Abstract：A method for determination of Erythromycin was established - screened by UV, re-screened by HPLC. The optimal determination conditions were obtained as follows: UV contained phosphate concentration 10mol / L, reaction temperature 80℃, reaction time 3min, detection wavelength 485nm; HPLC contained the column temperature 50℃, the wavelength 210nm. This method is convenient and suitable for batch determination of erythromycin. Key words：Erythromycin; Fermentation Liquor; UV; HPLC 作者简介：张宇（1987-），女，硕士研究生，研究方向为工业微生物的育种与发酵。 红霉素（Erythromycin，简写为Er）为白色或类白色的结晶或粉末；无臭，味苦；微有引湿性[]。分子式为C37H67O13N，分子量为733.91。红霉素是1952年问世的第一个由放线菌产生的14元环大环内酯类抗生素，抗菌谱和青霉素相似，主要是对革兰氏阳性菌如金葡菌、溶血性链球菌、肺炎球菌、白喉杆菌、炭疽杆菌及梭形芽胞杆菌等有强大的抗菌作用。对革兰氏阴性菌活性较差，并可用于青霉素过敏患者。虽然现今抗菌药物越来越多，红霉素在治疗领域仍占有自己的地位。其适应症似乎还在扩大。尤其是半合成红霉素衍生物的开发成功如阿齐霉素(Azithromycin)、甲红霉素(Clarithromycin)、地红霉素(Dirithromycin)、罗红霉素(Roxithromycin)、氟红霉素(Flurithromycin)，使得大环内酯类抗生素在未来的抗感染药物中所拥有的市场份额进一步加强和扩大。 测定抗生素效价的国际常用方法是管碟法[]，是利用抗生素在特定实验菌的琼脂培养基内的扩散作用，形成一定浓度的含抗生素的球型区，抑制了试验菌的繁殖而呈现出透明的抑菌圈，将已知效价的标准溶液和未知效价的供试样品溶液在相同条件下进行培养，比较两者的抑菌圈的大小，利用各种不同的计算原理，就可以准确地测定出供试样品的效价。但是在使用标准样品比较时，由于各种因素的影响使得抑菌圈在相同剂量下偏小，不规则，且对低剂量的效价难于测定，使效价测定的误差更大。而红霉素与磷酸进行水解反应显色在特定波长处有最大吸收，利用这一特性我们可以用紫外可见分光光度法（UV）代替管碟法进行红霉素效价的测定。 紫外可见分光光度法[-]只能测其总效价，而不能将多组分的红霉素的各种组分分离或分别计算其含量。红霉素是多组分的抗生素，除部分A外，尚有少量或微量的B、C、D等，因此，明确单独红霉素A的效价很重要。 高效液相色谱法[]是20世纪70年代初发展起来的一种新型分离分析技术,它是在经典液相色谱基础上，引入气相色谱理论，在技术上采用高压输液泵、剃度洗脱技术、新型高效填充剂以及各种高灵敏度检测器，与经典液相色谱相比较，具有分析速度快、分离效率高、灵敏度高和操作自动化等优点。所以我们可利用HPLC来测定红霉素A的含量。 本文把UV作为发酵液中红霉素效价测定的初筛方法，然后将高效价的发酵液进一步用HPLC进行复筛，考察红霉素A的含量。 1 材料与方法 1.1菌种 红色链霉菌