转座子Tn233（CH）中转座基因的鉴定和定位.pdfVIP

遗传 学报，12(2):106--112,1985 Acta GeneticaSinica 转座子Tn233C（H）中转座基因的鉴定和定位 王宗阳 洪孟民 （中国科学院上海植物生理研究所） Tn233(CH）是从国内临床分离的耐药痢疾杆菌中找到的一个转座子，已经绘制了它的物 理图，它与转座子 [n‘21基本相同。用限制性内切酶 EcoRl和 BamH1对带有转座予Tn233 (CH）的质粒pBR322::,rn233(CH）进行不完全消化，如此产生的DNA片段经 ’14DNA连 接酶连接后转化到 E.coliC600细胞中，获得了一些保留有转座功能或失去了转座功能的转 座子缺失变种。互补试验的结果表明，保留有转座功能的Tn233(CH）缺失变种在反式位置上 对失去了转座功能的 ’Tn233(CH）缺失变种有互补作用。对这些缺失变种在DNA上缺失的 区域进行限制图分析，确定了转座子 Tn233(CH）中转座基因的位置。 细菌转座子是质粒上能够移动的一类 DNA顺序．它们除了带有与转座功能有关的 基因与顺序外，还带有一些与转座功能无关的基因，如抗药基因、热稳定的肠毒素基因 等181［。近几年在转座子的分子与遗传结构的研究中，对转座子 Tn3研究得比较清楚，已 经测出了TO 的全部核昔酸顺序，除确定了它所携带的氨苇青霉素抗性基因的位置及 它的两端有38饰 的反向重复顺序外，还鉴定出了．与Tn3转座功能有关的两个基因及其 位置，即转座酶基因 I（n户）与解体酶基因 I（npR)，以及一段与转座有关的称为IRS或（ res)的DNA顺序71〔。此外，对 Tn2603与Tn21[s中的转座基因也开始进行了研究。 这些工作对了解转座子的转座机理以及相类似的一些转座子在演化上的关系具有重要的 意义。 Tn233(CH）是我们实验室从痢疾杆菌抗药质粒 DR233上找到的一个转座子，它带 有链霉素、磺胺和汞离子抗性基因[1]。我们已经绘制了它的物理图[6,2，和遗传图4)『，它与转 座子 Tn21基本相同。本文报道Tn233(CH）中转座基因的鉴定与定位的研究结果。 材 料 与 方 法 菌株及其培养条件、质粒 DNA 的制备、凝胶电泳、细菌转化和药物抗性测定 均 见以前报道仁，1。 质粒 pBR322::Tn233(CH)DNA缺失变种的构建 限制性内切酶对质粒DNA 的完全消化是在含有 Tris100mM pH7.5,MgCl210mM,NaClS0mM,DTT2mM 的 缓冲液中进行。反应混合物在37℃中保温30分钟，然后在65℃加热10分钟终止反应。 不完全消化时反应系统同上，但限制性内切酶经稀释不同倍数后加入，不完全酶解的程度 由琼脂糖凝胶电泳检测。终止反应后的混合物用酶解缓冲液稀释2倍，冷却到一8℃左右， 本文于 1983年12月5日收到。 2期 王宗阳等：转座子 Tn233(CH）中转座基因的鉴定和定位 1a; 加入 DTT和ATP使它们的最终浓度分别达到 10MM 和 1MM，再加人1单位的T4 DNA连接酶，反应混合物在8℃保温24小时，然后对细菌进行转化。EcoRI系东风试 剂厂产品，BamHI按Wilson等人的方法制备(1a［],T4DNA连接酶为汪大建博士赠送。 转座检测 带有共存质粒 [R144-drd3或它的衍生物和pBR322::Tn233(CH）或 它的衍生物］的E.coliC600供休菌株和 E.coli802(Nalr）受体菌株分别在营养肉汤 中生长过夜，以2外的接种量将二者接人同一瓶新鲜营养肉汤中，在37℃中振荡通气培 养4小时，再静置保温2小时，培养物适当稀释后涂布在含有不同药物的营养琼脂平板 上，，待菌落长出后统计转移接合子数目并测定其抗药类型。 从带有 R144drd3::Tn233 (CH) 有（时是被测定的Tn233缺失衍生物）的转移接合子数目与只带有 R144drd3的 转移接合子数目之比，才算出Tn233(CH）或其缺失变种的转座能力。 结 果 与 讨 论 一（）Tn233(CH）缺失变种的构建及其转座能力的检测 将