中国田鼠卵巢细胞gpt基因自发和亚砷酸钠诱发突变的分子分析.pdfVIP

遭传 HEREDITAS(Beijing)19(5):10-131997 .A3F 究 报 v 小麦苯丙氨酸解氨酶基因和几丁质酶基因 转录起始点的鉴定① 廖玉才 李和平 华（中农业大学作物遗传改良国家重点实验室，武汉 430070) RainerFischer 德（国亚深技术大学植物及分子遗传研究所 亚深 52056) 摘 要 本文应用改良的引物延伸法，鉴定了一个小麦的苯丙氨酸解氨酶和几丁质酶基因的转录起始 点。这种方法只需少量同位素，SephadexG-25柱和严格的杂交条件。利用两种基因的特定引物及总 RNA进行的引物延伸反应产物在电泳的凝胶上均呈现一条十分清楚的带，表明这两种多拷贝小麦基因 的转录分别起始于一个核昔酸。小麦苯丙氨酸解氨酶基因的转录起始点为5-CTGCCGAGT-3序‘列中 的第 2个C；而小麦几丁质酶基因转录起始点为 5-ATCACCAGC-3序‘列中的第 2个A。它们都分别 位于各自基因TATA盒的下游。 关键词 引物延伸法，小麦，苯丙氨酸解氨酶基因，几丁质酶基因 IdentificationoftheTranscriptionStartSitesofaPhenylalanine Ammonia一lyaseGeneandaChitinaseGeneFromWheat LiaoYucai LiHeping (StateKeyLaboratoryofCropGeneticImprovement,HuazhongAgriculturalUniversity,Wuhan430070) RainerFischer (InstitutfurBiologiel(Molekulargenetik/Botanik),RWTHAachen,D-52056Aachen,Germany) Abstract Animprovedprocedureforprimerextensionanalysiswasusedtoidentifythetranscription startsiteofaphenylalanmeammonia-lyase(PAL)geneandachitinasegenefromwheat.Thisprocedure requireslessamountofisotope,aSephadexG-25columnandhighlystringenthybridizationconditions. OnedistinctbandwasdetectedineachprimerextensionreactionwithtotalRNAextractedfromwheat leavesandtheprimersspecificforthewheatgenes.Theseresultsindicatedthatthetranscriptionsforboth geneswereinitiatedatasinglenucleotiderespectmely.ForthePALgene,thebandcorrespondedtothe positionofthesecondCinthesequence5-CTGCCGAGT-3,whileforthechitinasegene,itcorre- spondedtothesecondAinthesequence5-ATCACCAGC-3.Bothtranscriptionstartsitesarelocated downstreamoftheirTATAbox. ①国家自然科学基金和 “九五”国家攻关资助的课题 5期 廖玉才等：小麦苯丙氨酸解氛酶基因和几丁质酶基因转录起始点的鉴定 ］1 KeywordsPrimerextensionanalysis,Wheat,Phenylalanineammonia-lyasegene,Chi