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遗传 HEREDITAS(Beijing)15(2):36-371993 一个实用的制备EMBL4DNA的方法 岳彬彬 易清明 武（汉大学生物系，武汉430072) ASimpleandRapidMethodforthePreparationofEMBL4DNA YueBinbin YiQingming (BiologyDepartment,WuhanUniversity,Wuhan430072) 以往人们通常用氯化艳梯度超速离心法 们（、甘油梯度超速度离心法 ”〔等方法纯化噬菌体．采用这些方 法，虽然可以获得纯净的又噬菌体颗粒，但需要昂贵的试剂和仪器．操作也冗长繁琐．我们采用并改进了 Reddy(I〕的方法，首先用DE。纤维素柱层析纯化A噬菌体颗粒，然后用酚抽提，从提纯的噬菌体中分离 DNA，这个方法简单快速，不需要氯化艳梯度超速离心，也不使用SDS,蛋白酶和核酸酶。 材 料 和 方 法 1菌株 AEMBL4噬菌体和宿主细菌DER654由中国科学院上海植物生理研究所洪孟民教授惠赠． 2.宿主细胞EDR65；的制备，噬菌体的单斑纯化和原种制备以及大量EMBL4噬菌体裂解液的制备 参照 Reddy等 ’（）的方法进行． 3用DES：纤维素柱层析纯化EMBL4噬菌体 用处理好的DES：纤维素装柱 柱（高40cm，直径 1.6cm), 并用TM液5（0mmol/LTris-HCIpH7.8,10mmol/LMgS04平衡，然后将休积为15ml的噬菌体悬液 即（ 1000MI效价为2xIO0pfu/ml的噬菌体裂解液经PEG沉淀．氯仿处理后的噬菌体悬液）加到柱上，用TM液 洗脱，流速约36-40ml/hr，分部收集，每份1.2m1，从每管取出5U1，向其中加人2p10.1mol/L(pH8.0）和 知，12%SDS，在0.7 琼脂糖凝胶上电泳。检测含有噬菌体颗粒的分部，合并这些分部，向其中加入 5mol/LNaCI和冰预冷的异丙醇，至终浓度分别为400mmol/L和40%.置-20C15分钟，6000g离心 10分 钟 4（C1），弃上清，将纯净的噬菌体颗粒沉淀悬浮于4m1TE中，置4C贮存． 4.EMBL,DNA的分离 参照-Reddy等 （，‘的方法进行 结 果 与 讨 论 1.噬菌体与宿主细菌最适感染比例 用不同量的EMBL4噬菌体感染ED865；细菌，得到不同效价的 EMBL,噬菌体 表（1)，当感染比例为1/30时，效价最高，达1.2x100pfu/mi. 表1不同噬菌体与宿主细菌感染比例对效价的影响 EMBL,/ED8654 I／20 1／30 1／50 1／80 效 价p（fu/ml) 6x109 1.2x10o 8x109 5x109 2.DE52柱析洗脱曲线 图1是粗噬菌体悬液过DES：纤维素柱的洗脱曲线。从电泳分析结果 图（2)可以 看出，第24-32管只含有EMBL,噬菌体，不含RNA．第24管为深蓝色．效价测定结果表明，此管效价为8 36 x102pfu/ml，故其中的噬菌体 8（x102pfu/mlx1.2ml)是裂解液，总效价 2（x100pfu/mlx1000m1）的 48 ，表明DES：柱层析有很好的分离和浓缩作用．将24--32管中的洗脱液合并，经酚抽提后，得到约600u,g DNA_ 图2图1中峰1内各份洗脱液的琼脂糖凝胶电泳分析 1-6分别为第22,24,26,28,30,32管，7为上柱前的噬 图1曦菌体悬液过DES：纤维素柱的洗脱曲线 菌体悬液 3．光谱性质 所得 EMBL,DNA具有典型的 DNA光谱吸收曲线，其 A260/A280=1.82; A260/A130=2.12，表明EMBL,DNA是纯