玉米叶片中PX4和PX5基因及其翻译产物生化特性的分析.pdfVIP

遗 传 学报， 13 “）：346-352,,1986 Acta Genetica Sinica 玉米叶片中PX4和PX5基因及其翻译产物 生化特性的分析 杨太兴 曾孟潜 （中国科学院遗传研究所，北京） 1981-1985年，用垂直平板聚丙烯酸胺凝胶电泳方法，分析了102个组合共3,230株第 4带和第5带的遗传表现和分离情况。结果表明第4带和第5带很可能是受一对同源染色体 上两对靠近而又完全连锁的结构基因P（X4PX4px5px5或Px4Px4PX5PX5）和相应的调节基因所 控制。制备电泳纯化后的第5带由5.24x,11万道尔顿、PI值为 5.05士0.12的1条肤链组 成；第4带由5.989,12万道尔顿、P1值分别为5.31士0.06,5.60士0.11和5.79士0.11的3 条肤链组成。均由14种氨基酸组成，第4带的残基数略多于第5带。SDS电泳分析结果，第4 带为9条多肚，第 5带为 if条多肤。 1961年 MuCune[21，首次报道了玉米过氧化物酶同工酶，尔后Hamill等L17]、Shannon 等1211、Hunter等“”、MacDonald等20〔J、Hasegawa等 〔‘，“和 Brewbaker等13〔，对玉米过 氧化物酶同工酶迸行了基因位点的研究，确认重要的酶带受9个结构基因位点的控制。 Brewbaker等，〔，又‘进一步把PX3基因定位在第7染色体上。然而在其翻译产物生化特性 的分析方面还未见报道。我们在研究玉米同工酶时，观察到过氧化物酶同工酶第4带和 第5带多存在于绿色组织中，并和亲缘关系、杂种优势、籽粒发育等有密切的关系4.6〔-8,1010 本文报道 PX4和 PX5基因位点的遗传分析，并将其翻译产物进行制备电泳和纯化、等 电点测定、氨基酸组成分析、分子量和沉降系数 S（)测定，进一步研究和鉴定 PX4和 PX5 基因位点的遗传控制和生化特性。 材 料 和 方 法 一（）材料 埃一、埃十、塘＋、黄早4,罗系3,748788,Mol7,G4040-5550和四路糯。按以前 方法61‘建成过氧化物酶同工酶酶谱纯自交系，然后杂交、自交和回交。以四路糯、埃一、 Mo17和埃十八叶期的叶片制样，制备电泳纯化第4带和第，带，应用于各项分析。 二（）方法 1.x,测定 按北京农业大学农学系选种教研组+［l的方法进行。 2．过氧化物酶同工酶的检侧 按以前论文所述7[30 3，过氧化物酶同工酶第4带和第5带的制备 按以前论文所述71〔制样和电泳 北（ F六一仪器厂多用途电泳装置）。根据染色结果定位，切下含第4和第5带的胶条、剪碎、 本文于 1985年9月 17日收到。 5期 杨太兴等：玉米叶片中 PX4和 PX5基因及其翻译产物生化特性的分析 347 浸提、过滤、减压冰冻浓缩 瑞（典 Edwards冰冻干燥器）后为粗酶制品，其酶蛋白含量相当 针鲜重的。.011-0.018多，酶活性较高 5（mg酶蛋白即可在电泳胶板上显带）。 以上均在 冷凉条件下进行。． 4.氨基酸组成分析 按谭复隆等L12，方法略加改进，将粗酶制品进行两次电泳精制、 透析、浓缩，分3组分别酸水解24,48和72小时，重复3--5次，用日立高速氨基酸自动分 ．析仪 （日立835-50型）测定。 5.沉降系数 S（)测定 按刘培楠等[2l［方法进行，将粗酶制品经透析和电泳浓缩 美（ 国 ISCO1750型）或减压冰冻浓缩，复溶后蛋白质浓度为1.52.0mg/mt，平均温度200C, 用 日立282型分析超速离心机测定。 6．等电点聚焦电泳 按 SatoruTokumasu等2[3l方法略加改进，单垂直平板和垂直 管聚焦电泳的凝胶浓度为5.1并，上槽负极电泳液含。.4务(V/V）三乙醇胺，下槽正极电 泳液含0.3务(V/V）浓硫酸。先‘以0.059mA/mm2稳流，然后稳压300V 北（京六一仪器厂 DYY-1112型稳压稳流电泳仪），15小时后取下胶板，用酸度计 美（国 Backman）测pH值， 并用回归方程求出相关系数 r二0.98741