质粒R144drd3对于基因工程载体pHC79和pCB2诱动的研究.pdfVIP

遗传 HEREDITAS(Beijing 6-(1）：9-101984 研 究 质粒R144drd3对于基因工程载体 报 pHC79和pCB2诱动的研究 告 朱建华 陈孝康 张伯生 （复旦大学遗传学研究所，上海） 质粒的诱动作用包括两个方面，一个是诱 mKF一 p（BR322)t61; 动供体细胞染色体的转移，这我们已有报道121［. E.tollK12C600leutbrthirecBC-rK 另一个是诱动非结合质粒的转移。有些质粒可 mKF一 R（3F2124)t121; 以通过细胞结合进行转移，这就是结合质粒；而 E.coliK12C600leuthrtbirecBC-rK 非结合质粒，是不能靠质粒本身媒介自己在细 mlF-(pCB2)t;t； 胞间进行转移的。这种非结合质粒有许多在细 E.coliK12），一3prometF一R（144drd3)t1; 胞同时携带结合质粒时，可以通过结合质粒的 E.coliSKleuthrthilacrKm{(PHC79)，一，。，。 诱动，结合转移进人受体细胞。从安全性角度 二（）质粒 考虑，作为基因工程载体的质粒，应该既不能自 表1 供试质拉特征 身转移，又不能被诱动转移。 pHC79和pCB2是基因工程载体，是pBR 质 粒 特 征 夹 源 322的衍生品系。pHC79具有COs位点，分子 R 144drd3 KnIR piR322 ApR.rcR 量小，仅6.43kb，但可在与大到40kb的外源 pHC79 ApAPRTCR 上海植物生理研究所赠 DNA片段形成杂种分子后经体外包装进噬菌 RSF 2124 ApAPR 上海植物生理研究所赠 体，转导进人受体细胞，形成克隆，是一个适于 p户R2 AnAPR 上海细饱生物研究所赠 贮藏基因及钓取所需基因的载体。pCB2是含 有d噬菌体 DNA左右启动子、有利于外源基 三（）培养基 因在受体细胞中表达的基因载体。 1.LB培养基111 供培养细菌及测定菌 我们通过pHC”和pCB2分别与结合质 株抗药性时用。Rif,Ap分别为50Fcg/ml,Km 粒R144drd3共存时被诱动转移的频率的计算， 30gg/mlo 说明pHC”及pCB2作为安全性载体是合适 2.M9培养基51 供抽提质粒DNA培 的。 养细菌用。视需要加人氨基酸15ug/ml，维生 素0.5,ug/mlo 材 料 和 方 法 3．基本培养基1［ 供鉴定菌种用。 一（）细菌品系 （四）细菌抗药性质粒的结合转移 按 E.tollK12XACargZara0(prolac)Na1R 文献 【11方法进行。 RifRr. 五（）细菌抗药性质粒 DNA 的提取 E.eoliK12HB101proleurecA一rKmK 按文献L41步骤进行。 F-171. Zhu万anhuaetal..Stud