质粒DNA转化E. Col I的最适条件的研究.pdfVIP

鱼堕二IEREDITAS(Beijing三6(4);1-21984 研 究 报 质粒DNA转化E.coli的最适条件的研究 告 李谐勋 彭秀玲 李育阳 郑兆鑫 贺沛富 严维耀 （复旦大学遗传学研究所，上海） 在基因工程技术的研究中，如何改善转化 果与讨论”部分。 的有效性是一个非常重要的研究课题，它直接 结果与讨论 影响到实验的成败。1970年 Mandel等5［1发现 经氯化钙处理的E.coli细胞可以吸取I噬菌 我们在 Dagert方法的基础上，进行了以下 体 DNA,,1972年 Cohen等3［，证明氯化钙处理 几方面的转化条件试验。 过的细胞对于质粒 DNA也是一个很有效的受 一（）氛化钙溶液的浓度对转化效率的影 体。1979年Dagert等，〔报‘道了延长氯化钙处 响 理时间能提高质粒 DNA的转化效率4-6倍。 用pBR322DNA作供体，分别转化经 而目前在 E.coli克隆化系统中基本上仍沿用 25mM,50mM,75mM和l00mm氯化钙溶液 Cohen转化法。 处理的C600细胞，结果如图1所示，以75mM 本文报道我们对 Gagert方法作了某些改 氯化钙溶液处理的这组实验的转化效率最高。 进，使转化效率进一步提高20多倍，为提高工 ︵ 乙 一 作效率提供了有效的方法。 x ） v N 口 材料和方法 帜 （一）菌种 根 ＼ 长 牟 1.E.coliGM31(pBR322）为质粒 DNA 娜 ‘ 供体菌。 d 2.E.coliC600(pFD201)[1，为重组质粒 y DNA供体菌。 3.E.coliC600 (recBC-rk-mk-thr-leu mM CaCl, thi-）为转化受体菌。 图1CaCI,溶液的浓度与转化率的关系 4.E.coliSK1590 (tonAgalthisbcB15 endAhsdR4）为转化受体菌。 二（）氯化钙溶液的pH 对转化效率的影 二（）LB培养基 蛋白陈10克、酵母 响 膏5克、氯化钠5克、葡萄糖1克，水1,000毫 将 75mM氯化钙溶液分别调pH至5,6, 升、pH7.5,8磅／时，灭菌20分钟。 7和 8，仍如上进行转化，实验结果以pH6氯化 三（）质粒 DNA 的分离纯化