一个小黑麦附加-双代换花粉株系(M16)的创制与鉴定.pdfVIP

遗传 HEREDITAS(Beijing)21(4):54一561999 兰宗 玉返 家蚕分子连锁图谱的构建及分子标记育种研究进展工 李 斌，鲁 成，周泽扬， 向仲怀 西（南农业大学蚕桑学农业部重点实验室，重庆 400716) ProgressinConstructingofMolecularLinkageMap andMolecularMarkersAssistedBreedinginSilkworm LIBin,LUCheng,ZHOUZe-yang,XIANGZhong-huai (TheKeySericulturalLaboratoryofAgriculturalMinistry,SouthwestAgriculturalUniversity,Chongqmg400716,China) 中图分类号：Q963 文献标识码：A 文章编号：0253-9772(1999)04-0054-56 国际蚕分子育种计划 （InternationalSilkworm Project）是Rhode Island大学的M.R.Goldsmith在 1991年提出来的，也叫基因标记育种计划 ’〔）．该计划主要包括两步工作：第一步是制作蚕的分子基因图，第二 步是数量性状定位分析简（称QTL分析，也叫数量性状定位作图二QTL Mapping)。最后利用分子标记直接在 DNA水平进行重要经济性状数（量性状）的选择、固定，即实施’分‘子育种”，用很短时间育成兼具高抗·强健、 丝多、质优、易繁等特性的新蚕品种，本文对此进行简要介绍。 1 家蚕分子连锁图谱的构建 遗传图谱既是遗传研究的重要内容，又是家蚕资源、育种及分子克隆等许多应用研究的理论依据和基础。目 前，已有多项分子标记技术用于构建家蚕连锁图，包括限制性片断长度多态性简（称RFLP)、随机扩增多态性 DNA(M称RAPD)、选择扩增DNA片段 简（称SADF)等技术 · 1.1 RFLP构图 Goldsmith等首先采用两个’近‘交系”蚕品种P50(热带种）、C108 （中国种）的原种、F,.F，回交或F：个体 蚕为材料，分别由这些个体蚕的早期卵滤泡细胞mRNA合成cDNA,构建以).gtll为载体的cDNA文库，再用 卵壳蛋白、丝心蛋白、rDNA.BmAntp等已克隆的21个基因作探针。检测用EcoR工、PsrI、Hind且、Sac 工、Nd。工、Xb“工等6个限制性酶组合消化的个体蚕cDNA文库，进行Southern杂交，筛选得到60个蚕的 DNA标记。其中13个标记分布在已知的10个基因座位上，且已被克隆；另有9个标记是反转录转座子．利用 MAPMAKER分析，此60个标记中52个标记分别分布在16个连锁群染（色体），还有8个无连锁，若认为其各 代表一个连锁群染（色体），则此60个RFLP标记可能代表了蚕的全部28个连锁群染（色体）中的24个2.〔31。 RFLP虽已成功地运用于其它动植物的构图与标记育种，但两方面的原因使RFLP标记尚难直接用于家蚕 标记育种；一是由于家蚕可用的RFLP探针数很少，而制备探针亦非易事，难以绘制高密度连锁图；二是由于 RFLP标记对DNA的需要量较大 5（--10 ftg)，技术也较为复杂，费时费事，同时需投人大量的资金·故目前 这方面的工作受到阻碍。 1.2 RAPD构 图 ＿D收稿日期：199-04-14;修订日期：1998-05-10 4期 李 斌等：家蚕分子连锁图谱的构建及分子标记育种研究进展 55 RAPD是以基因组DNA为模板，以一个随机的寡核昔酸序列通（常为lObp）作引物，通过PCR扩增反 应，产生不连续的DNA产物，用以检测DNA序列的多态性。它的主要优点是简单易行，需要的DNA量极少 (15-25ng)，无放射性，实验设备简单，周期短 因此受到研究者的普遍欢迎。多数RAPD标记表现为显性， 使用该法时要注意两点：一是严格控制模板DNA和Mg++浓度和反应条件保证其扩增稳定性；二是必要时可与 等位特异性PCR(AS-PCR)14〕或特殊序列扩增S（equenceCharacterizedAmplifiedRegions，简称SCAR)’〔〕 等方法结合使用。AmornratPromboon等用P50,C108原种及F,,FZ个体为材料，采用RAP