DNA损伤试剂对HeLa细胞的细胞周期检查点的影响.pdfVIP

摘要 摘要 p53蛋白参与了细胞周期检查点和DNA修复等多种生命活动中，在维护基因 组完整性中发挥重要的作用。多种类型的肿瘤中均发现p53的突变，提示肿瘤细 胞体系中DNA损伤检查点的机制可能不同于正常的组织细胞。 为探讨在p53失活的肿瘤细胞中DNA甲基化试剂引发的DNA损伤对于细胞周 期的影响，我们将同步化在G1期、S期和G2／M期的HeLa细胞分别进行甲磺酸 甲酯(MMS)处理。MMS的处理结果表明，各个时相的细胞周期进程均发生延迟 或阻滞，其中S期细胞对药物最为敏感。进一步分子机理研究表明，三个时相中 ATM-Chk2和p38MAPK通路均被激活，但是检查点激酶l(Chkl)仅在S期中被 活化，提示Chkl特异地参与了S期的DNA损伤检查点(DNAdamagecheckpoint) 或者DNA复制检查点(DNAreplicationcheckpoint)的作用。为了进一步确定 Chkl在S期检查点中的功能，我们用专一的小分子抑制剂抑制Chkl的磷酸化， 发现被MMS处理的S期细胞能在未完成复制的情况下进行异常的有丝分裂；提示 用。我们还检查了参与G2／M期进程的cyclinB1的表达变化情况，在MMS处理 的