水牛TREM1和LBP基因shRNA干扰序列的筛选.pdfVIP

水牛TREMl和LBP基因shRNA干扰序列的筛选 摘要 的抑制将阻断LPS与CDl4的结合路径。为了阐明布氏杆菌病发生相关基 因信号转导机制，同时为利用RNA干扰技术培育抗布氏杆菌病转基因动物 序列进行了筛选。 一、TREMl基因shRNA筛选与病毒感染水牛单核细胞的初步研究 1．克隆水牛和黄牛TREMl基因mRNAORF全长序列，构建水牛 水牛TREMl基因在293细胞中的表达。结果发现，克隆得到的水牛和黄牛 到GenBank(JQ390222)。 79．24％和31．14％。 3．从水牛外周血中分离单核巨噬细胞，用TREMlshRNA慢病毒感染 果表明，分离纯化水牛单核巨噬细胞，可在体外培养1周；TREMl和CDl4 基因在巨噬细胞中均有表达，CDl4基因的表达量高于TREMl的表达。在 未经任何刺激情况下，shRNA病毒颗粒感染单核巨噬细胞的效率不高。 二、LBP基因shRNA片段筛选 1．克隆水牛和黄牛LBP基因，构建其融合蛋白表达载体 在293细胞中的表达。结果发现，分别克隆得到的水牛、黄牛LBP基因序 表达。水牛LBP基因成功提交到GenBank(JQ390223)。 2。针对水牛LBP 212抑制 效率分别为49．53％，29．27％。 的抑制效率较高达到63．07％$EI 并分离纯化获得了水牛单核巨噬细胞。 CDl4 LBP布氏杆菌病 关键词：RNAi慢病毒表达载体TREMl II SCREENINGVALIDSHRNA OFBUFFALOTREM1 SFQUZNCES ANDLBPGENE ABSTRACT Intheimmune elicited of responsesbygram-negative on call1 affectCD14 trlggenngrecepptormyeloid (TREM1)will gene jLrl theTLR4．mediated expression signaling pathway，inhibiting willblockLPS／CD14 lipopolysaccharide—bindingprotein(LBP)expression inLPS the transduction recognitionJsignaling．To pathway exploresignal mechanismsofbrucellosisand the of RNAi finallystudy feasibilityusing to anti-brucellosisanimals．Inthis technologyproducegenetically