Survivin基因靶向RNA干扰重组表达载体构建和测序论文.pdfVIP

·英文缩略语· 6 中国医科大学研究生学位论文独创性声明 本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及 取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论 文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或 其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研 究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。 论文作者签名：翅丝五 日期：逖星芏∽la 中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书 本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在 攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学。本人保证毕业离 校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师 为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国 家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学 校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，以采用影印、缩 印或其他手段保存论文。 论文作者签名： j鱼垄垫 指导教师签名： 鱼2碰垒 日 ·中文论著摘要· Survi Vi n基因靶向RNA干扰重组表达载体构建和测序 刖 罱 自1998年F讹等首先报道后，RN～技术迅速在功能基因组等领域发挥出了 强大的作用，并且随着对哺乳动物细胞内一系列基因表达水平的成功下调以及细 胞导入手段的改进。与基因替代、反义核酸等传统的基因治疗方法相比，RNAi技 术有着明显优势。RN越是指生物体内干扰性小RNA引起与其同源mRNA的特异性 降解，因而抑制其相应基因表达的过程。RN魁在肿瘤研究方面也广泛应用，如肿 瘤的发病机制、侵袭与转移、信号传导、细胞周期调控、凋亡和治疗等多方面。 导细胞凋亡。Collis等为抑制修复DNA损伤的酶(如人运动性共济失调一毛细管扩 张ATM蛋白，转录调节蛋白抗体与DNA蛋白激酶催化亚单位)以增强放射和化疗 细胞分别沉默这三种酶的表达，结果细胞内人运动性共济失调一毛细管扩张ATM 蛋白、转录调节蛋白抗体与DNA蛋白激酶催化亚单位的蛋白质水平均显著下降， 并且在抑制人运动性共济失调一毛细管扩张ATM蛋白与DNA蛋白激酶催化亚单 位的表达后细胞对放射的敏感性明显增强。 在两种途径：一种是经典的CaSpaSe途径，另一种是通过促进细胞分裂而抑制细胞 凋亡。在后者survivm作为一种主要的染色体“过客’’蛋白，参与细胞分裂多方 面的调节。鼬slli等检测了前列腺癌组织中的survivinmRNA水平，在前列腺癌组 GleaSon分级、淋巴结转移、血管侵袭、切口阳性率等情况均明显较差，同时survivm 技术，成功诱导了肿瘤细胞的凋亡，这在胃癌、宫颈癌、卵巢癌、大肠癌等肿瘤 中已得到证实。 本实验采用RNAi技术，以survivin为靶基因，成功设计、构建两条能够在细 胞内表达针对survivin基因的siRNA表达载体，为临床基因治疗前列腺癌奠定了 良好的基础。 材料和方法 一、材料 pBAsi-mU6-pur载体，E．coli 抽提试剂盒为美国Omega公司产品。 二、实验方法 mRNA(NM001168)。参考shRNA的设 1、首先在Genebank中检索survivin 选出两条片段作为survivin基因干扰片段。以间隔序列连接干扰片段正向和反向 siRNA)的 序列。两端加酶切位点，最后得到具有回文结构和发夹结构(hairpin 干扰片段序列，用BLAST检索设计的DNA片段序列