抗氧化药物对抗皮肤光老化的研究.pdfVIP

抗氧化药物对抗皮肤光老化的研究 沈干林金德张春丽高原温传俊 南京医科大学二附院(东院)整形美容中心 实验主要构建了UVA照射人皮肤成纤维细胞应激性衰老模型，观察9J／cm2 UVA照射对人皮肤成纤维细胞(HSF)应激性衰老的作用，及不同浓度的白藜芦醇 RESVERATROL)对UVA造成应急性衰老有无有效干预作用。 材料与方法 材料 胎牛血清购自wi 购自Promega公司；细胞衰老13半乳糖苷酶染色试剂盒；SS—04型紫外光疗仪 (UVA)，购自上海希格玛高技术有限公司；紫外辐照仪，购自北京师范大学光电 仪器厂；微量移液器，购自德国Eppendorf公司 00mL)：1 DMEM培养液(1 5％FBS，双抗lmL 细胞衰老B一半乳糖苷酶染色观察白藜芦醇对UVA对人皮肤成纤维细胞造成应激 性衰老的保护作用 1．1方法 1．1．1细胞培养及UVA照射 1)用含l5％FBS的高糖DMEM，于37℃、5％C02培养箱中培养人皮肤成纤维细胞 (HSF-P8)。 2)取对数期生长细胞，细胞数为4．5×103令／cm2，接种于3．5cm细胞培养 皿，每个培养皿2mL。 3)实验分为七组，分别为：a对照组；b UVA照射组；cUVA照射并加入8一甲氧 基补骨脂组；d RESVERATROL组；eUVA照射加入8一 UVA照射加入8-MOP和50ng／mL MOP币11OOng／mLRESVERATROL组；fUVA照射加入8-MOP幂1200ng／mL RESVERATROL组。 RESVERATROL组；gUVA照射加入8一MOP署11000ng／mL 4)24h后，向相应组加入80ng／mL8一MOP币150ng／mL、1OOng／mL、200ng／mL、 1000ng／mL白藜芦芎醇(REsVERATROL)。 相应浓度RESVERATROL。 1．1．2细胞衰老B一半乳糖苷酶染色试剂盒对各组细胞染色 1)UVA照射96小时后吸除细胞培养液，PBS洗一次。 2)加入lmL13半乳糖苷酶染色固定液，室温固定l5分钟。 3)吸除细胞固定液，用PBS洗3次，每次3分钟。 4)吸除PBS力I入染色工作液。 5)37℃孵育过夜，但孵育不能再二氧化碳培养箱中进行 6)光学显微镜下观察、拍照。 ．71． 2实验结果 翻濯飘 曩●■ 蚕 所取腰代培养人皮肤成纤维细胞第八代细胞，A对照组；BUVA照射；CUVA照射井加入 8-甲氧基补骨(80n盯m)脂；D EUVA照射加^8-MOP(80n蝴1 0 8，MoP(80n驴砷和20蚴眺映REsVERATRoLj 1000n瞅RESVERATROL 胞造成应激性衰老的保护作用 2 1细胞总RN^的提取 HSF P11代细胞的培养及处理方法同一中的细胞培养及UVA照射 2 1提取RNA 22 i 6孔板细胞(CNE一2)舡台度为90—100％时，取出无菌室，去其上清，用 PBS洗两次后，每孔_131TRIzoL试剂(Gibco公司)1mi，摇匀，无菌罩内消化35分 钟(观察：液体变粘稠，细胞脱壁)。 22 jⅢl 2将各孔内消化好的细胞裂解液吸到一DEPC处理过的lEP管中，加 2 新开的氯仿0 m1，轻摇15秒。 22 5mi 3宅温静置2—3分钟后，i2000rpm，i n，4℃，离心。然后取上清无