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华东地区第十二届实验动物科学学术交流会 393
王桂良文剑波文萍徐林芳龚敏唐琳
江西省萍乡市人民医院33701)0
h)。逆行胰胆管注射5
只雄性SD大鼠随机分成5组,假手术组、ANP组和El?#ff疗组(12h,24h,48
HMGBl
液促炎因子TNF.ft.、HMGBl的水平基因表达,对ANP有明显保护作用。
[关键词]重症急性胰腺炎;丙酮酸乙酯;高迁移率族蛋白B1;TNF一仅
重症急性胰腺炎(acutenecrotizing
box
周感染是ANP的主要死因。最近研究表明,高迁移率族蛋(381(highmobilitygmup 1,HMGBl)在炎性
反应中表达升高较TNF—Q晚且维持时问较长,是一种重要的晚期炎性介质,参与了多器官功能障碍的发生、
发展过程,能给脓毒症带来更广的“治疗窗…。丙酮酸乙酯(ethyl
酮酸衍生物,许多研究表明它具有抗炎和免疫调节作用。我们通过大鼠重症急性胰腺炎动物模型,观察丙
酮酸乙酯对TNF—a和HMGBl表达的调节作用,探讨丙酮酸乙酯对重症急性胰腺炎肠黏膜损伤的保护作用及
其机制,为临床治疗提供理论依据。
1材料与方法
1.1材料
CruZ
析系统(美国Kodak)。兔抗HMGBl多克隆抗体(Santa
体重250~300
实验室,许可证号:SYXK(赣)2008—0006。
1.2方法
1.2.1动物模型制备
h,48h)。采用逆
将30只sD大鼠随机分为5组,每组各6只,假手术组、ANP组及EP治疗组(12h,24
氯胺酮腹腔注射麻醉后,无菌条件下剖腹,提起十二指肠,以小号血管夹分别夹住十二指肠和肝门部肝胰
除穿刺针,去除血管夹。见胰腺组织充血、水肿,被膜下有散在出血点和血性腹水,标志造模成功。对照
[基金项目]江西省科技厅资助项目(基金号:20091391308000)
[作者简介]王桂良,主治医师。研究方向:急性胰腺炎的诊治。E--mail
394 华东地区第十二届实验动物科学学术交流会
组以剖腹后仅翻动十二指肠后关腹;假手术组仅切开腹后翻动胰腺,以注射牛磺胆酸钠6d,时作为胰腺炎
模型。
1.2.2检测指标和检测方法
假手术组在手术完成即取血和胰腺组织,SAP组在注射牛磺胆酸钠后6小时血和胰腺组织,EN组在EN
后第12h、24h、48h为时间点取血和胰腺组织。采用Westernblot方法检测HMGBl组织蛋白表达,酶联
免疫吸附双抗夹心法(ELISA)检测血清7FNF—Q、HMGBl水平,按试剂盒说明进行操作。
胰腺组织TNF一Ⅱ、HMGBl
mRNA表达:取胰腺组织约80mg,以异硫氰酸胍一步法提取细胞总RNA,采
用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)检测删TNF-(71、HMGBl
30
内对照。引物见表1,所用程序:94℃预变性4min,94℃30sec,退火温度见表1,72。Csec,30
u
个循环,最后于72。C再延伸10min。4℃终止反应。取51_PCR产物于1.5%琼脂糖凝胶电泳检测。溴乙锭
染色后于紫外透射仪摄像。
退火温 扩增长
基因 引物
度(℃) 度(bp)
SenCe 5’一ATGCCTGCAGCCC(;AGG
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