连续流动式聚合酶链式反应微流控装置的实验研究.pdfVIP

第 34 卷 分析化学 ( FENX I HUAXU E) 　仪器装置与实验技术 第 8期 　　　　　　　　　 　　　　　　　　　 2006年 8月 Ch ine se Journal of Analytical Chem istry 1197～1202 仪器装置与实验技术 连续流动式聚合酶链式反应微流控装置的实验研究 1, 2 1 3 3 章春笋 　徐进 良 　王建琴 　王汉平 1 (中国科学院广州能源研究所微能源系统实验室 , 广州 510640) 2 ( ) 3 ( ) 中国科学技术大学热科学和能源工程系 ,合肥 230026 　　 广州市第一人民医院 ,广州 510 180 ( ) 摘 　要 　连续流动式聚合酶链式反应 PCR 微流控装置是以低热容量的软薄膜加热器为基础构建 3个恒温 ( ) 带 , 以聚四氟乙烯毛细管微通道为 PCR 反应体系组建而成 。报道了在毛细管微通道中小牛血清蛋白 B SA 动力学表面钝化对 PCR 扩增的影响 ,讨论了 PCR 混合物在毛细管微通道中的流动速度对 PCR 扩增的影响 , β 在 15 m in甚至 10 m in 内成功扩增了长度为 249 bp 的人类 肌动蛋白片断 ,扩增时间仅 10 ～15 m in,而传统 PCR 仪则需 1～2 h。 关键词 　毛细管 , 连续流动式聚合酶链式反应 ,微流控装置 1　引　　言 ( ) [ 1 ] 聚合酶链式反应 PCR 技术已经在生物医学 、临床诊断、环境检测等领域得到广泛的应用 。传 统 PCR 装置一般通过金属块以及空气或液体循环来控制 PCR 温度循环 ,系统通常具有较大的体积和 ( ) 热容 ,从而导致 PCR 速度很慢 通常为 1～2h 。为了克服传统 PCR 装置固有的缺点以实现快速的 PCR 扩增 ,早在上个世纪 90年代初就开展了基于微流体的 PCR 生物微流控装置研制 [ 2 , 3 ] 。目前 , PCR 生物 微流控系统主要有两种形式 [ 4 ～6 ] :反应池 内固定扩增式 PCR 和连续流动式 PCR 。前者实际上是传统 PCR 的微型化 ,反应混合物固定在微反应池中 ,反应池的尺寸常常限制样品的体积 ,反应时间及其能量 消耗主要受系统的热容量所控制 ,为了取得较快的加热 /冷却速度往往需要对系统热容量进行精确的优 化 。连续流动式 PCR 的优点主要有 : ( 1) PCR 中加热 /冷却速度一般不受装置的系统热容量所限制 ,而 ( ) ( ) 是受 PCR 混合物流动速度控制 ; 2 样品溶液的蒸发较小 ; 3 通过连续地提供不同的生物样品来实现 同一反应体系中的不同生物样品的连续扩增 ,大大节省时间和简化操作 ; ( 4 ) PCR 混合物的体积可在