马铃薯gbss、ssⅡ和ssⅢ基因片段的融合及其RNAi载体的构建.pdfVIP

马铃薯gbss、ssⅡ和ssⅢ基因片段的融合及其RNAi载体的构建.pdf

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中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,2008,28(8):51~56 马铃薯gbss、ss 和ss 基因片段的 Ⅱ Ⅲ 融合及其RNAi载体的构建 1,2 1 1 陈国梁  张金文  王 蒂 (1甘肃农业大学农学院 兰州 730070 2延安大学生命科学学院 延安 716000) 摘要 颗粒结合淀粉合成酶(GBSS)与可溶性淀粉合成酶(SSS)是淀粉合成的关键酶,其活性大小直 接影响着淀粉的直链淀粉/支链淀粉比例、淀粉链长及结构等,进而影响淀粉品质。利用blast及分 子生物学软件DNAStar对gbss、ss和ss 基因的cDNA序列同源性进行分析比较,选用gbss的261bp Ⅱ Ⅲ (1~261),ss的244bp(2164~2407),ss的281bp(161~441)的cDNA片段,并应用重叠PCR法将其 Ⅲ Ⅱ 拼接成一融合基因gbss,构建了以CaMV35S启动子驱动的含有“正向gbss融合片段pdk内含子 ? ? 32 32 反向gbss融合片段”ihRNAi的植物表达载体,为培育糊化温度低的马铃薯品系奠定基础。 32 关键词 RNAi 马铃薯 融合基因 重叠PCR 中图分类号 Q789   马铃薯(SolanumtuberosumL)淀粉是一种廉价易 能表型的缺失现象。这一现象属于转录后的基因沉默 得的再生性资源,已成为许多生产领域的重要原料,但 机制(Post-transcriptionalgenesilencing,PTGS)。利用 在许多应用领域中,都要求淀粉具有较低的糊化温度 这一技术应该可以有效、特异性降解靶标基因mRNA, 和较弱的凝沉性,因而淀粉的糊化性和凝沉(老化)性 阻止靶标基因的表达。近年来,有关植物方面的RNA [2] 成为其应用的重要参考指标,而这两种性质主要与直 干扰研究已相当活跃并已取得了很大的进展 。 链淀粉/支链淀粉比例、淀粉链长以及淀粉的结构有 GBSS、SS 、SS 是马铃薯淀粉合成的3种关键酶,其 Ⅲ Ⅱ [1] 活性对马铃薯淀粉的直链淀粉/支链淀粉比例、淀粉链 关 。因此,培育具有较低糊化温度和优良凝沉特性 [3~5] 的品种已成为近年来马铃薯品质育种工作的重要目 长及结构有一定的影响 。本研究拟以gbss、ss 和 Ⅲ 标。目前,马铃薯新品种的培育主要是通过品种间杂 ss 基因为靶标,分别从中选取部分保守序列并形成融 Ⅱ 交和促进芽变来筛选突变体,但由于马铃薯栽培种为 合基因片段gbss,构建以CaMV35S启动子驱动的含 32 同

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