动物学研究技术李龙201100140092.pdfVIP

动物学研究技术期中报告 2014,5,5 对虾白斑综合症病毒囊膜蛋白Vp28 的诱导表达及蛋白纯化 （201100140092 李龙 2011生物基地 [Abstract] 囊膜蛋白VP28是对虾白斑综合症病毒(white spot syndrome virus , WSSV )主要 致病蛋白。本实验选取实验室提供的含Vp28基因原核表达载体pET-30a (+)的工程菌，大肠杆菌 BL21 (DE3),经 IPTG诱导表达, SDS检测Vp28蛋白的表达。在0.5mMIPTG诱导8 h后获得了 2+ 更多的可溶性表达的目的 蛋白，并通过（2）号菌株大规模培养，Ni 柱亲和层析纯化得到了较纯 的目的蛋白。本实验用于制备Vp28蛋白多克隆抗体, 为探讨WSSV病毒感染的分子机制和对虾的抗 病毒研究提供基础. [Keywords] Vp28;对虾白斑综合症病毒;诱导表达;亲和层析纯化; O 糖基化位点不过在试验中并未发现蛋白被, 1.Introduction 糖基化修饰 研究发现. ,Vp28 蛋白在病毒感 对虾白斑综合症病毒 ( white spot 染过程起重要作用。本实验对Vp28蛋白进行 syndromevirus ,WSSV) 是引起对虾爆发性 表达条件优化和蛋白纯化 用于制备多克隆, 流行病 并导致急性死亡的头号杀手 作为 抗体 为探讨, . , WSSV病毒感染的分子机制和 WSSV 的主要结构蛋白 囊膜蛋白, VP28在病 对虾的抗病毒研究提供基础. 毒侵染宿主细胞的过程中发挥重要作用。膜蛋 1.1重组蛋白表达条件的优化 白Vp28是病毒包膜上含量最高的一种蛋白, 用乳糖操纵子作为启动子进行蛋白质表 首先由Van从纯化的病毒中分离并进行蛋白 达的时候需要诱导物进行诱导，利用, IPTG(异 N , DNA cDNA -D ) 末端测序通过病毒的 和 文库 丙基 β 硫代半乳糖苷 在结构上与乳糖的 分析发现了, Vp28基因 且发现, Vp28在感染 相似性也可以将基因表达启动但它不能被细, 6h 18h , , 后 和 仅能够检测到低水平表达 推测 胞利用掉从而实现持续的表达。因此诱导时 Vp28应该是一种晚期基因 免疫电镜定位证 间越长，表达量就会越多。, VP28为一种重要 实Vp28分布在病毒的外表面。 的病毒囊膜蛋白，在不同的条件下，其会以不 同的状态存在于大肠杆菌中：IPTG 的浓度越 大，培养时间越长，就更容易以包涵体沉淀的 形式存在，而IPTG浓度越小，培养时间越短， 就更容易以可溶性蛋白的形式存在于上清中。 为了便于重组蛋白的纯化，我们需要更多的 VP28蛋白在上清中表达。而同时，IPTG诱导 会对细胞造成一定的负荷，抑制其生长繁殖，