蕨麻正丁醇部位对EAHY926内皮细胞缺氧损伤的保护作用及机制的研究.pdfVIP

中文摘要 蕨麻正丁醇部位对EAHY926内皮细胞缺氧损伤的 保护作用及机制研究 摘 要 目的：研究蕨麻正丁醇部位对EAHY926内皮细胞缺氧 损伤的保护作用，并探讨其可能机制。 下培养，至EAHY926细胞生长成单层后备用。②采用MTT、 台盼蓝染色及LDH(乳酸脱氢酶)活性检测，确定细胞的适 宜缺氧时间，建立细胞缺氧损伤模型。③细胞随机分为正常 对照组、缺氧损伤模型组、复方丹参阳性药物组、蕨麻正丁 入蕨麻正丁醇部位)。MTT法检测细胞代谢活力、台盼蓝染 色观察细胞存活率、比色法检测细胞外LDH活性。④H．E 染色观察细胞形态的变化。⑤检测细胞内超氧化物歧化酶 (SOD)活性、脂质过氧化代谢产物丙二醛(MDA)含量。 ⑥检测细胞外一氧化氮合酶(NOS)活性、一氧化氮(NO) HIF．1 Q、ET-1、eNOS、iNOS mRNA表达，免疫细胞化学 染色及WesternBlot检测各组细胞HIF．1Q、eNOS蛋白表达。 结果： l 在倒置显微镜下观察，正常组EAHY926细胞生长旺 盛，呈上皮样贴壁生长，折光性强，细胞呈多角形或长梭形， 中文摘要 鹅卵石样铺满底层。 2蕨麻正丁醇部位对EAHY926细胞缺氧损伤的保护 作用：(1)MTT：与对照组比较，缺氧损伤模型组细胞代谢 活力下降(氏O．01)；与缺氧损伤模型组比较，高、中、低 剂量蕨麻正丁醇部位组细胞代谢活力均显著提高(尸O．01)。 (2)台盼蓝染色：高、中、低剂量蕨麻正丁醇部位蓝染死 细胞数量均减少，细胞存活率提高(低剂量组P0．05，高、 中剂量组P0．01)。(3)H．E染色：缺氧损伤模型组细胞皱缩， 核固缩、深染，细胞间隙增大，细胞间联系减少。蕨麻正丁 醇部位干预后，上述损伤均减轻。(4)生化指标：与对照组 比较，缺氧损伤模型组细胞外LDH活性显著升高(尸O．01)； 与缺氧损伤模型组比较，蕨麻正丁醇部位各剂量组细胞LDH 活性均显著降低(尸O．01)。 3蕨麻正丁醇部位对EAHY926细胞缺氧损伤保护作 用的机制研究：(1)生化检测：与对照组比较，缺氧损伤模 较，蕨麻正丁醇部位组可提高内皮细胞内SOD活力(氏0．05， O．05)。与对照组比较，缺氧损伤模型组细胞NOS活性增加 而蕨麻正丁醇部位各剂量组与缺氧损伤模型组比较细胞NO 降低(氏O．01)。(2)免疫细胞化学染色：缺氧损伤模型组 较对照组细胞HIF．1a蛋白表达水平增加(氏O．01)，eNOS 蛋白表达水平降低(氏O．01)；与缺氧损伤模型组比较，高、 中剂量蕨麻正丁醇部位组、复方丹参组细胞HIF．1Q蛋白表 中文摘要 达水平均降低(尸O．01)；蕨麻正丁醇部位各剂量组、复方 QmRNA、 RT-PCR：与对照组比较，缺氧损伤模型组HIF一1 ET-1mRNA、iNOS mRNA表达水平显著升高(尸O．01)， eNOS 组比较，蕨麻正丁醇部位各剂量组、复方丹参组细胞HIF一1 QmRNA水平显著降低(氏O．01)；高、中剂量蕨麻正丁醇 部位组、复方丹参组ET-1mRNA表达水平降低(尸O．01)； 高、中剂量蕨麻正丁醇部位组、复方丹参组eNOSmRNA表 mRNA表达水平降低(尸O．01)。(4)WesternBlot：缺氧损 伤模型组较对照组细胞HIF．1 表达降低(尸O．01)。与缺氧模型组比较，蕨麻正丁醇部位 各剂量组及复方丹参组细胞HIF．1Q表达降低(高剂量组 蕨麻正丁醇部位组及复方丹参组细胞eNOS表达均升高 (尸O．01)。 结论：蕨麻正丁醇部位能够减轻缺氧对EAHY926细胞 的损伤，减少LDH释放，增强细胞代谢活力，提高细胞存 活率，对EAHY926细胞缺氧损伤具有保护作用。这种保护 作用的机制可能为：在缺氧时提高细胞清除氧自由基的能 a 力；增加eNOSmRNA表达，促进NO产生；并经HIF．