康莱特联合吉非替尼对人肺腺癌A549细胞株FAS、AKT2蛋白及mRNA表达的影响.pdf

目 录 中文摘要………………………………………………………………………1 英文摘要………………………………………………………………………5 及mRNA表达的影响 前言………………………………………………………………………9一日U菁……………………………………………………………………… 材料与方法……………………………………………………………．．11 结果……………………………………………………………………．．19 附图……………………………………………………………………．．22 附表…………………………………………．…………………………．29 讨论……………………………………………………………………．．35 结论……………………………………………………………………．．41 参考文献………………………………………………………………．．41 综述FAS蛋白与非小细胞肺癌关系研究进展……………………………48 致谢…………………………………………………………………………．57 个人简历……………………………………………………………………．58 中文摘要 康莱特联合吉非替尼对人肺腺癌A549细胞株FAS、AKT2 蛋白及mRNA表达的影响 摘 要 目的：肺癌是发生率和死亡率居于首位的恶性肿瘤，晚期非小细胞肺 癌(NSCLC)的治疗效果更不理想。吉非替尼是一种表皮生长因子受体一 酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKl)，它能有效抑制肿瘤细胞的生长、侵袭、 转移并能抑制肿瘤新生血管的形成。随着近些年EGFR-TKII临床应用的深 疗方法，但随之发现的耐药问题成为了限制EGFR-TKI疗效的一大难题， 因此，寻找能够增加EGFR—TKI疗效、甚至能解决其耐药的方法成为了目 前研究的热点。康莱特注射液是传统的中药抗肿瘤制剂，一些研究发现， 康莱特联合化疗能显著提高晚期非小细胞肺癌的治疗效果，有协同增效、 增敏甚至逆转耐药的作用。大量临床研究发现，P13K／AKT通路被持续活 化，抑制肿瘤细胞的凋亡是吉非替尼疗效受限的一个重要作用机制。本实 验应用MTT方法、流式细胞学、免疫组织化学，逆转录聚合酶链式反应 尼联合康莱特对A549细胞株的作用及其机制。 方法： 1体外培养人肺腺癌A549细胞，选取对数生长期细胞进行实验。实 验分为空白对照组，吉非替尼组，康莱特组，吉非替尼联合康莱特组；吉 非替尼组设置浓度梯度为：O．1、0．5、 colorimetric 甲基偶氮唑蓝(tetrzolium-basedassayMTT)法分别测 定各药物不同浓度，不同作用时间的抑制率。 中文摘要 48h后，应用流式细胞学检测各处理组中细胞凋亡率情况。 3选取对数生长期细胞置入六孔板培养，分别加入吉非替40umol／L 应用S-P免疫组织化学方法检测FAS、AKT2蛋白的表达。 4取对数生长期细胞，调整细胞浓度为5×i04／ml接种于培养瓶中， 根据对照组与实验组分别加入药物作用48h后提取RNA，检测总RNA的量、 纯度及完整性，反转录合成cDNA，设计引物，通过聚合酶链反应将cDNA 扩增，扩增产物经过电泳，应用凝胶成像系统及分析软件对FAS．mRNA、 AKT2-mRNA进行分析。 结果： l MTT结果显示： 细胞抑制率明显增加，PO．05，差异有统计学意义；每个药物浓度随着作 差异有统计学意义；表明康莱特单药对人肺腺癌A549细胞株的抑制作用 有剂量效应及时间效应依赖关系； 1．2用MTT法测吉非替尼作用于人肺腺癌A549细胞株时的细胞抑制率 O．05，差异无统计学意义。表明吉非替尼单药对人肺腺癌A549细胞株无 明显的浓度、时间依赖。 1．3MTT法检测康莱特联合吉非替尼对人肺腺癌A549细胞株的抑制率 康莱特联合吉非替尼作用于A549细胞后，其细胞抑制率高于单药组， 随着吉非替尼浓度的增加，其细胞抑制率逐渐增加，尸O．05，差异有统 计学意义；随着两药联合作用时间的增加，对细胞的抑制率亦逐渐增加， PO．0