兔脂肪来源干细胞分离培养及富血小板血浆对其增殖影响.pdfVIP

兔脂肪来源干细胞分离培养及富血小板 ’ 血浆对其增殖的影响 硕士生姓名： 陈锦 指导教师： 胡 刚教授 专旨导，j、组： 秦宏智教授 李芳教授 专业名称： 外科学 摘要 背景：自体脂肪移植已有上百年的历史，因其来源丰富、取材容易、操作简 单、充盈外形好、无排异反应等优点，倍受整形美容外科医生的重视，但同时也 存在不足之处，其中最主要是移植后脂肪细胞的成活率较低(60％)。如何提高脂 肪细胞的增殖及分化能力，是提高移植成活率的重要环节。随着脂肪组织工程的 发展及研究，寻求来源广、易获取、损伤小、稳定扩增的种子细胞和无免疫反应、 高效、廉价、配比协同作用好的生长因子是关键问题。 vedstemcell 目的：分离培养兔脂肪来源干细胞(adipose—deri s，ADSCs)， 并观察ADSCs体外生长的生物学特性及增殖分化潜能，探讨自体富血小板血浆 (platelet—richplasma，PRP)对ADSCs增殖的影响。 方法：1．实验采用新西兰大白兔，取兔颈背部区脂肪垫，贴壁法及I型胶原 酶消化法体外培养兔ADSCs，观察其形态特征。 2．取第3代ADSCs进行成脂、成骨诱导分化，两周后油红O成脂染色及三周 后茜素红成骨染色鉴定。 3．抽取兔心脏血，采用二次离心法制备PRP，并行全血及PRP血小板计数。 20u1)，采用CCK-8 (细胞180ul+全血血浆20u1)和PRP组(细胞180ul+PRP 法(Cell Counting 殖活动的影响。 结果：1．原代培养的细胞24h后见少量椭圆形细胞贴壁，大部分未贴壁细胞 为圆形的红细胞及筋膜杂质。48h首次换液，除去未贴壁的红细胞及筋膜杂质，见 小部分贴壁细胞呈短梭形，其间也可见三角形、多角形细胞。3d后见部分细胞已 贴壁伸展，呈长梭形，可见核分裂相，梭形细胞逐渐增多。7d后见细胞80％一90％ 融合，细胞呈漩涡样生长，大小不一，细胞多为长梭形成纤维细胞样。传代细胞 4—6h即可贴壁，细胞形态与原代相似，细胞生长速度较原代细胞明显增快。 2．细胞成脂诱导两周后油红0染色呈阳性，对照组为阴性；细胞成骨诱导三 周后茜素红染色呈阳性，对照组为阴性。 3．全血血小板计数为(313．O±137．5)X109／L，PRP血小板计数为(1267．0 --+760．2)X 10VL，PRP血小板计数是全血的4．08倍。 在第24h、48h、72h时，与全血组有统计学差异(PO．05)。 结论：1．通过胶原酶消化法从兔颈背部区提取的脂肪组织分离得到的细胞， 经鉴定证实为ADSCs。采用这种方法获得的细胞增殖迅速，可长期传代并维持稳定 的增殖能力。 2．ADSCs具有多向分化潜能，在特定条件下能够向成骨细胞、脂肪细胞方向 诱导分化，可作为组织工程的种子细胞。 3．通过二次离心成功提取兔PRP，血小板计数后，PRP的血小板计数控制在全 血的4倍以上，二次离心法是制备PRP的有效方法。 4．自体PRP对体外培养的兔ADSCs增殖有明显的促进作用。 关键词：脂肪间充质干细胞富血小板血浆细胞培养细胞增殖 2 Isolationandcultivationofrabbit adipose·-derived stemcellsandtheinfluenceof platelet--rich