利用氨甲蝶呤-琼脂糖凝胶进行噬菌体展示人肝脏cDNA文库筛选的方法研究.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００７，２７（１０）：７０～７４ 檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪殏 檪 殏 殏檪檪 技术与方法殏檪 檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪 用氨甲蝶呤偶联琼脂糖亲和吸附法从人肝脏ｃＤＮＡ 噬菌体展示文库中筛选氨甲蝶呤相互作用蛋白 １，２ １ １ １ 于晓明 　张维冰 　张丽华 　张玉奎 （１中国科学院大连化学物理研究所国家色谱研究分析中心　大连　１１６０２３　２　中国科学院研究生院　北京　１０００４９） 摘要　目的：利用氨甲蝶呤（ＭＴＸ）偶联琼脂糖凝胶吸附法从人肝脏细胞ｃＤＮＡ噬菌体展示文库 中筛选与ＭＴＸ相互作用的蛋白。方法：以偶联于琼脂糖凝胶表面的ＭＴＸ为配基，通过“结合－洗 脱－扩增”过程筛选与ＭＴＸ相互作用的噬菌体。利用ＰＣＲ对筛选结果进行监测，对筛选得到的 噬菌体ＰＣＲ产物进行序列测定和基因同源性分析。结果：通过五轮亲和筛选富集到特异噬菌体 克隆，再通过ＰＣＲ获得ｃＤＮＡ插入片段。通过ＢＬＡＳＴ程序搜索ＧｅｎＢａｎｋ，证明筛选到的片段与人 ＰＩ３Ｋ相关蛋白激酶ＳＭＧ