油茶枯饼中天然抗氧化剂提取和筛选.pdfVIP

摘 要 我国南方地区包括江西省盛产油茶，油茶经榨取油料后的枯饼中尚存在很 多活性物质，如茶皂素，多糖，黄酮类物质等等，但由于长期得不到合理和充 分的利用，导致资源浪费，甚至对环境也造成了一定的污染。对油茶枯饼这种 废弃资源的回收利用不仅有助于缓解环境压力，而且对提高油茶副产品的经济 价值和社会价值有着非常重要的意义。 本论文以油茶枯饼中的茶皂素、多糖和黄酮类物质为研究对象，应用微波 萃取装置分别对其中的茶皂素和多糖进行微波萃取研究。讨论了乙醇浓度、提 取时间、固液比和提取温度（功率）对提取率的影响。通过正交试验，得到微 波提取茶皂素的最佳工艺条件为萃取剂90％乙醇-水溶液、固液比1:20 （w/v ）、 萃取时间9 min 和萃取温度90 ℃；提取茶多糖的最佳工艺条件为纯水提取、提 取时间为 16 min 、固液比 1:20 （w/v ），功率为 800 W。并将微波提取的粗多糖 经通过乙醇醇析和大孔树脂分离纯化，得到不含茶皂素、黄酮及蛋白质组分的 多糖产品。 用硅胶柱层析法，以氯仿- 甲醇-水（70:30:5 ，v/v/v ）为洗脱液从茶皂素的 微波提取物中分离得到两种主要黄酮，经 UV, ESI-MS 数据解析和相关文献对 比，对其结构进行了确证，这两种黄酮分别为山奈酚3-O-[2-O-β-D-木糖-6-O-α -L- 鼠李糖]-β-D-葡萄糖苷( Ⅰ)和山奈酚3-O-[2-O-β-D-半乳糖-6-O-α -L- 鼠李糖]-β-D- 葡萄糖苷( Ⅱ) ，其分子量为分别为726 和756 。以两种黄酮苷为对照品，建立了 测定油茶枯饼提取物中两种主要黄酮的高效液相色谱方法。 利用本文建立的毛细管电泳法、HPLC 法，和参考文献的苯酚-硫酸法分别 测定了油茶枯饼中茶皂素，黄酮和多糖的含量，为茶枯饼活性资源的开发利用 提供理论基础，经测定，以上三种成分在茶枯饼中的含量分别为 16.96％、4.92 ％和11.25％。通过显色反应、光谱扫描和HPLC-MS 分析对大孔树脂乙醇梯度 洗脱物中的茶皂素，黄酮进行了纯度鉴定，结果表明，60% 乙醇洗脱组分为茶 皂素，其分子量分布范围为 1190-1332Da，10％、20 ％乙醇洗脱组分为两种黄 酮的混合物，可用于抗氧化活性研究。 采用化学发光法，利用发光体系 CuSO -phen-VitC-H O -DNA ，分别考察了 4 2 2 油茶皂素，多糖和黄酮类物质对羟基自由基引发DNA 损伤的保护作用，以半抑 制率浓度大小反映这三种物质的抗氧化能力强弱，并且与芦丁、槲皮素和绿原 I 酸等公认的强抗氧化剂进行了比较。结果表明油茶皂素和黄酮具有较显著的抗 氧化能力，而油茶多糖的抗氧化能力不明显；油茶皂素较油茶黄酮、芦丁、槲 皮素和绿原酸四种物质的抗氧化活性要弱；油茶黄酮抗氧化活性较芦丁、槲皮 素的抗氧化活性弱，但略强于绿原酸。 关键词：油茶枯饼，茶皂素，黄酮，高效液相色谱，化学发光，抗氧化活性 II ABSTRACT It is rich in Camellia Oleifera in South china, including Jiang Xi province. There are many active substances in the oiltea seed cakes after squeezing out the fuel oils， such as：tea saponin ，polysaccharides, flavonoids ，and so on. As the oil-tea seed cakes have not been fully usd for a long time, the resources are be wasted and cause much pollution to the environment. So it is very important to develop the resou