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硕士研究生开题报告 血管内皮生长因子及其受体与鼻咽癌淋巴道转移关系的研究 导 师： 姚运红 副 教授 时 间： 2003年10月8日 2﹑裸鼠体内注射抗VEGF—A﹑ VEGF—C抗体，观察癌组织内血管﹑淋巴管形成及癌细胞的转移情况，为临床应用抗血管生成药物治疗鼻咽癌提供一定的理论依据。 3﹑探讨c-myc是否可以作为一种肿瘤转移相关基因通过促血管生成来促进鼻咽癌的转移 第三部分 技术路线 技术路线 CNE-1 CNE-2Z-H5 CNE-2Z-H5-9 ISH IHC Western blot ELISA 基因及蛋白表达 接 种 裸 鼠 VEGF-A VEGF-C Flk-1 Flt-4 c-myc 抗VEGF-A VEGF-C 抗体 技术路线 鼻 咽 癌 裸鼠移植瘤 常规组织切片﹑染色 ISH IHC 血管﹑淋巴管的显示计数 基因及蛋白表达 VEGF-A VEGF-C Flk-1 Flt-4 c-myc 抗VEGF-A VEGF-C 抗体 CNE-1 CNE-2Z-H5 CNE-2Z-H5-9 免疫组化 鼻 咽 炎 技术路线 空载质粒 带有VEGF-C基因 的重组质粒 分别转染CNE-1 裸 鼠 接 种 肿瘤的转移情况 CNE-1 CNE-1G CNE-1GV 主要实验方法 ISH﹑IHC﹑ - 检测人鼻咽炎及鼻咽癌组织及裸鼠移植瘤组织中VEGF-A﹑VEGF—C及相关受体及c-myc的蛋白表达及mRNA的分布 主要实验方法 ISH﹑IHC﹑ - 检测鼻咽癌细胞中VEGF-A﹑VEGF—C及相关受体及c-myc的蛋白表达及mRNA的分布 主要实验方法 ELISA﹑ Western blot -对人鼻咽癌细胞培养液内中VEGF-A﹑VEGF—C及相关受体及c-myc 表达产物进行定量分析 主要实验方法 Flk-1﹑ Flt-4作为内皮细胞标记物的免疫组化 -裸鼠移植瘤组织内血管﹑淋巴管的显示及计数 预期结果 第四部分 1﹑VEGF-A﹑VEGF-C及相关受体的表达水平与鼻咽癌的微血管﹑微淋巴管形成﹑淋巴结转移呈正相关；在VEGF中，VEGF—C对鼻咽癌的淋巴道转移起着主要作用，而VEGF-A有一定的协同作用。 2﹑应用抗VEGF-A﹑VEGF—C的抗体可以抑制癌组织内血管﹑淋巴管形成及癌细胞的转移，有望成为治疗鼻咽癌的一个比较好的靶点。 * * 硕 士 研 究 生 开题报告 硕士研究生开题报告 研究生：余健华 立题依据 第一部分 血管生成与肿瘤的浸润转移 浸润和转移 是恶性肿瘤最重要的生物学特性 肿瘤转移的基本过程 肿瘤细胞脱落并侵人基质 进入脉管系统 癌栓形成 在继发的组织器官生长 血管生成与肿瘤的关系 原发肿瘤和继发转移瘤在生长扩散 都依赖血管生成 新生的毛细血管为肿瘤的生长提供原料 新生的毛细血管（包括毛细淋巴管） 也是肿瘤侵袭转移的必须条件 血管生成在肿瘤中的作用 血管生成整个过程包括：内皮移行﹑ 基质降解和内皮增殖 这一过程的具体调控机制尚不清楚 血管生成的过程及调控 血管内皮生长因子与血管生成 血管内皮生长因子及受体的分类 血管内皮生长因子（VEGF）家族成员有VEGF—A(即以往发现的 VEGF ）﹑B﹑ C ﹑D﹑ E﹑ F 及 PIGF 高亲和力受体（VEGFRs）有三种，VEGFR—2(Flk-1/KDR) ﹑ VEGFR—1 (Flt-1) 及VEGFR—3 (Flt-4) VEGF受体与配体的结合 VEGF-B PIGF VEGF-A VEGF-E VEGF-C VEGF-D VEGFR-1 VEGFR-2 VEGFR-3 主要在血管内皮表达 主要在血管内皮表达 也可在淋巴管内皮 成人主要在淋巴管内皮表达 （研究表明在许多实体瘤肿瘤细胞中也有VEGFR表达） VEGF结构和分布 VEGF相对分子量为34-45KD，为二硫键连接的糖蛋白二聚体，基因定位于染色体6p12，有六种异构体 人正常组织VEGF mRNA及蛋白表达量甚微 在一些代谢旺盛血供丰富的组织表达稍高 在外伤愈合，胚胎发育和增殖期子宫内膜等中呈较高水平 在肿瘤细胞有过量表达 增加血管通透性 促进血管形成 使血管内皮细胞的倍增次数增加 使血管内皮细胞的某些周期相关基因 表达减少 影响树突细胞的成熟，使肿瘤细胞逃避免疫监视等 VEGF及受体的主要功能 已有研究表明VEGF高表达与许多肿瘤的转移和预后不良呈正相关，但其在鼻咽癌中的作用还有待进行系统的研究 V