β-内酰胺类抗生素发酵用玉米浆关键成分的分析.pdfVIP

摘 要 摘 要 玉米浆是工业发酵用培养基的重要组成部分，由于生产工艺、生产批次的差异和有 效成分的变化，会影响发酵产品的产量和质量。如何评价和控制用于发酵的玉米浆质量、 其有效成分和关键因子水平如何等受到了广泛关注。 本文采用高效液相色谱法对 β- 内酰胺类抗生素发酵用玉米浆中的关键成分——游 离氨基酸和 B 族维生素进行了分析研究；探索建立一种简便快捷、准确可靠、专属性强 的测定方法，为抗生素发酵用玉米浆的质量评价和发酵过程的控制提供依据。主要有以 下几方面的研究结果： （1）建立了以 2,4-二硝基氟苯为柱前衍生试剂的反相 HPLC 测定玉米浆中游离氨 基酸的分析方法。该方法步骤简单、反应快速、衍生物稳定、剩余试剂对方法无干扰。 18 种氨基酸在 50min 内可有效分离，重现性、精密度和回收率等各项指标均满足分析 要求，证明该方法可有效用于玉米浆中游离氨基酸含量的分析。 （2 ）测定了发酵生产用不同批次玉米浆中游离氨基酸的含量，并结合相对应玉米 浆的青霉素发酵结果进行分析，发现玉米浆中游离氨基酸含量变化与青霉素发酵结果之 间有对应关系。 （3 ）设计了添加不同含量氨基酸的玉米浆用于抗生素发酵试验，结果表明玉米浆 中氨基酸含量的变化对 β-内酰胺类抗生素的发酵有影响的。分析测定青霉素和头孢菌素 C 发酵过程不同阶段发酵液中游离氨基酸含量的变化，并结合发酵实验结果初步判断： 亮氨酸和苯丙氨酸对青霉素发酵有促进作用；谷氨酸、赖氨酸对青霉素发酵有抑制作用。 谷氨酸和甲硫氨酸对头孢菌素 C 发酵有促进作用；赖氨酸对头孢菌素 C 发酵可能无任 何积极作用。是否还有其他氨基酸可能对青霉素和头孢菌素 C 发酵生产有影响，需要进 一步进行探索。 （4 ）对反相HPLC 法测定玉米浆中 B 族维生素的方法进行了初步探讨。实验采用 离子对色谱法对玉米浆中 B 族维生素进行分离，线性关系、精密度和分离度良好。研究 发现，加样回收率不够理想的主要原因可能是三氯乙酸变性蛋白过程中破坏了玉米浆中 的部分维生素，本方法需要对样品的前处理方法进一步优化。 关键词 玉米浆 游离氨基酸 衍生 B 族维生素 高效液相色谱 I Abstract Abstract Corn steep liquor is the important part of industrial fermentation with medium. The differences in production technology and production batches, and the changes in effective ingredients, can affect the production and quality of the fermented product. How to evaluate and control the quality of corn steep liquor for fermentation, the effective ingredients and key factor is paid to extensive attention. HPLC method is adopted in this paper to analyze the free amino acids and B vitamins which are the key components for the beta-lactam antibiotics fermentation with corn steep liquor. In order to provide the basis of the corn steep liquor t