拟南芥抗灰葡萄孢相关基因的克隆与体外表达.pdf

摘要 为了获得拟南芥抗灰葡萄孢相关基因，在拟南芥Col-O生态型可以抵抗灰葡萄孢 侵染的基础上，将51，600个此生态型的T-DNA插入突变体接种该病菌以后，选定单拷 mutant)为进一步的试验材料，提取其 贝的感病突变体46D叫(Botry出susceptible ATlG01800属SDR(short-chain 原核表达后，提取活性蛋白发现对灰葡萄孢没有直接的抑制作用。经过生物和非生物 胁迫发现该基因在诱导抗病中起作用。 试验从51，600个拟南芥T-DNA插入突变体中筛选到12个灰葡萄孢的感病突变体。 通过接种后表型鉴定和在细胞水平上进行组织病理学染色观察发现，感病突变体在接 种第1d就有少许的死细胞出现，且随着接种时间延长细胞坏死速度加快，接种第5d 后叶片上出现肉眼可见的水渍状病斑，第8d，整个叶片干枯死亡，在显微镜下可以看 到死亡的叶片细胞内充满了灰葡萄孢的菌丝。而野生型Col-O植株的叶片上只出现了 过敏性坏死斑。 的多个影响因素进行了优化，并利用优化的TAIL-PCR条件扩增插入片段的左侧侧翼 定该基因与抗灰葡萄孢相关。 还原酶家族蛋白(short-chain 将体外表达的BOSA活性蛋白与灰葡萄孢共培养，发现蛋白对病菌没有直接的抑制 作用；AbosJl接种芸苔链格孢以后，表现出与野生型不同的症状；接种细菌 灰葡萄孢的抗性不是属于基因对基因的抗性模式，而是属于诱导抗病性的模式。对该 突变体进行了一系列的非生物胁迫，发现bosA基因在抵抗某些非生物胁迫中也起着 重要作用。经过DAB染色法研究发现，在接种灰葡萄孢以后，突变体的H202的含 量明显的高于野生型，且在第2d达到最大量，由此可以得知，该突变体对灰葡萄孢 增强感病性与ROls(ReactiveIntermcdiates)相关． Oxygen 关键词：拟南芥；灰葡萄孢；TAIL-PCR：基因克隆；体外表达； and invivothe Gene Expression Resistant-Related against Cloning ofArabidopsis Botry出cinerea Author：Kou Hongmei Supervisor：DONGJingao Major：Botany Abstract mutantsanditswild Columbiawhich resistant 51．600Arabidopsis’I：DNAtype being to cinemainoculatedthe mutant Botrytis by pathogen,aBotrytis·susceptiblename．,dZlbosA， whichis singlecopyofforeignDNAinthe gotten． nc ofT-DNAinsertwas TAIL-PCR．then left obtained flankingsequence by analyzedby thesoftwareof BLASTon thewebsite and http：／／