中草药蒲黄和桃仁的纤溶酶分离与纯化.pdfVIP

摘要 心脑血管疾病是危害人类生命和健康的主要疾病之一。因此研制、发展 高效、特异、安全、副作用小的溶血栓药物，一直是近年来全世界范围的热 门课题。我国中医药已有悠久的历史，其中有多种药物用于治疗血栓性疾病。 从对活血化瘀药物的研究看来，中药的开发与新药的发现己进入一个相互渗透的 新阶段。 本文的研究目的是筛选出具有纤溶酶活性的中草药，并对其进行分离和性质 鉴定。首先选用了临床常用的、具有活血化瘀作用的中草药蒲黄和桃仁，提取它 们的蛋白质，利用纤维蛋白平板法测定纤溶酶活性。用DEAE Flow SepharoseFast 离子交换层析从中草药蒲黄提取物中分离纯化一种具有体外纤溶活性的单一组 分，用纤维蛋白板检测分离后组分的纤溶蛋白活性，天然电泳检测分离效果，分 离后得到了比活力为25．29 U／mg的单一组分，SDS电泳确定该组分的表观分子 量为31，000D。 用不同的蛋白酶抑制剂作用该分离组分观察抑制作用，结果表明该组分的纤 维蛋白水解酶活性被PMSF、亮抑肽素、抑肽酶、大豆胰蛋白酶抑制剂以及苯甲 脒强烈抑制，表明该分离组分属于丝氨酸蛋白酶家族。该组分活性较强而且含量 较高，其分子大小较适合分子操作。 ． 以纤维蛋白平板为评价方法，采用80％硫铵沉淀、亲和层析法对桃仁纤维蛋 白水解酶进行纯化，利用大豆胰蛋白抑制剂作为配基，以环氧氯丙烷活化的 Sepharose4B为载体制备亲和层析介质，利用亲和层析对桃仁蛋白提取物进行了 分离，得到了一个单一的活性组分，分别采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(P：AGE)、纤 比活力及分离后蛋白的纤溶比活力测定和比较，分离组分的比活力为 89．08U／rag，纯化了7．37倍。 关键词：中草药；纤溶酶：纤维蛋白平板；吸光值；蛋白浓度；比活力 The andPurificationof from Separation FibrinolytieEnzymeTyphaangustifolia andSemen presicae Author：Wang-Guangyuan Tutor：Zhu—Baocheng andMolecular Biology Major：Biochemistry Abs打act Thrombuslisease health is and damagepeople’S seriously,itsmorbidityhigh rateandmortiferousrateare too．So themutilate high risingyearbyyear,while all side-effectmedicineisahot andlow spotproblem． developingeffective,safety usedin wcre Recent moleandmore were