雷公藤多苷诱导大鼠肾细胞凋亡的NF-kB信号传导通路机制研究.pdfVIP

摘 要 目的：1、本研究通过给予不同剂量的雷公藤多苷，观察在使用雷 公藤多苷后不同时间点，大鼠肾脏损伤的情况，从“时— 效”、“量— 效” 角度研究其对肾毒性的作用，为临床合理用药提供参考。 2、并探讨雷公藤多苷的肾毒性毒理机制，研究雷公藤多苷诱 导大鼠肾细胞的凋亡作用；探讨雷公藤多苷诱导肾细胞凋亡与NF-?B 活 性之间的相关性，从信号转导这一途径来分析雷公藤多苷肾毒性产生的 机制，为中药免疫毒理研究提供新的思路，对以雷公藤多苷为例的中药 免疫抑制剂的广泛运用提供确切的实验依据。 方法：SD 大鼠灌胃不同剂量的雷公藤多苷，连续给药 5 周，动态 处死大鼠，检测大鼠体重变化、肾功、肾病理，研究雷公藤多苷对大鼠 肾的毒性作用。 并通过免疫组织化学法，检测肾凋亡相关基因Fas 、Bcl-2、p53 等 的表达；流式细胞仪检测大鼠肾细胞凋亡百分率；酶联免疫法（ELISA） 检测肾组织中细胞因子TNF-a 的含量；免疫印迹方法（Western Blot） 检测NF-?B 在肾组织中的表达情况，探讨雷公藤多苷对大鼠肾的免疫毒 理机制。 结果：雷公藤多苷对大鼠体重、脏器指数、肾功和肾病理形态学结 果表明，雷公藤具有确定的肾毒性作用，这种肾毒性作用与用药时间、 剂量呈正相关。 雷公藤多苷给药5周后，和空白组比较，以剂量依赖的方式上调肾 细胞表面膜分子Fas、p53、NF-κB蛋白表达；下调bcl-2表达；并可使 2 肾组织匀浆中TNF-α的含量显著增加；凋亡的细胞数也明显增多。 结论： 1）通过“时-效”实验数据分析:雷公藤多苷低剂量在用药4、5周 即开始出现明显的肾损伤作用及酶学的升高，而雷公藤多苷高剂量在用 药3周即可引起肾损伤，其损伤表现为肾小管细胞的变性和坏死，且肾 细胞内出现凋亡的特征，提示临床合理用药：为尽量减少肾毒性，雷公 藤多苷成人日服60mg（按照雷公藤多苷片说明书日服剂量），连续服药 不宜超过3周较为安全。 通过“量-效”实验数据分析:雷公藤给药剂量在6.25mg/kg～ 56.25mg/kg范围内，表现出明显的量效关系，给药剂量越高，其肾毒性 越大。 2）雷公藤多苷免疫毒理机制：雷公藤多苷可诱导肾细胞凋亡，且 诱导肾细胞凋亡与NF-κB蛋白表达有关，通过NF-κB这条信号转导通路 诱导肾细胞凋亡是其毒性作用的可能机制之一。 关键词:雷公藤多苷；肾细胞；凋亡；NF-?B；“时— 效”、“量— 效” 3 Abstract Objective: To explore the effect about TWP induces apoptosis of kidney cells from when - effect, quantity - effect point of view. To explore the correlation between TWP induces apoptosis of kidney cells and NF-?B activity so as to analyse the mechanism of TWP Immunosuppression,and to provide precise experimental evidence for the extensive use of TWP as an example of traditional Chinese medicine immunosuppressant. . Methods: Immunohistochemical method was employed to detect the