B5羊实验性铜中毒的病理学研究邱志俊.docVIP

目 录 摘要 1 关键词 1 1．材料与方法 1 1．1实验动物 1 1．2实验器材 1 1．3方法 1 1．3．1急性铜中毒模型复制 1 1．3．2眼观病理检查 1 1．3．3病理组织学检查 1 1．3．3．1切片 1 1．3．3．2脱蜡染色 3 2．结果与分析 4 2．1 临床及眼观病理改变 4 2．2病理组织学改变 4 2．3分析 6 3．结果讨论 6 主要参考文献 8 英文摘要 9 致谢 10 急性实验性绵羊铜中毒的病理学观察 邱 志 俊 （甘肃农业大学动物医学院 2005级动物医学2班） 摘要：将6只成年绵羊，每日饲料中添加35mg/kg硫酸铜以复制急性绵羊铜中毒病例。实验6天后绵羊出现急性铜中毒症状，临床上病羊出现呕吐、腹泻、腹痛等症状，粪便粘稠、颜色暗绿。模型复制成功后，分别于实验第10、12天对6只绵羊全部放血致死，并进行仔细的病理学研究。结果表明，病羊全身黏膜程度不等发黄，血液粘稠。胃呈典型的急性卡他性胃炎，严重时甚至出血、糜烂、溃疡，尤其是真胃。肝脏广泛淤血、肿大，肝细胞广泛变性，小叶中心肝细胞坏死，网状内皮细胞增生，胆管上皮增生，甚至可见较多含铁血黄素和胆色素沉着。肾脏广泛变性坏死，尤其肾小管上皮细胞变性、坏死，肾小管内充满血红蛋白管型。肠黏膜上皮广泛脱落，固有层充血、出血，大量炎性细胞浸润。脾脏可见淤血、网状内皮细胞增生。因此本实验的研究对绵羊的饲养以及铜中毒的研究具有重大的意义。 关键词：绵羊 实验性 铜中毒 病理学 1 材料与方法 1．1实验动物：6只成年绵羊。 1．2实验器材：硫酸铜、石蜡、烧杯、切片机、玻片、包埋框、酒精、二甲苯、福尔马林、苏木精、伊红、染色瓶、光学显微镜等。 1．3方法 1．3．1急性铜中毒模型复制 6只实验性绵羊单独饲喂，每日每只饲料中添加35mg/kg硫酸铜，观察实验绵羊临床表现。当出现典型中毒症状后，再持续实验4-6天。 1．3．2眼观病理检查 对剖检的急性中毒绵羊，进行仔细观察和记录各组织、器官的眼观病理变化。并对主要病变组织、器官取材。 1．3．3病理组织学检查 1．3．3．1切片 对放血致死绵羊，分别切取心、肝、脾、肺、肾、肠系膜淋巴结和肠道各一块（1cm3），固定于10%中性福尔马林液中。被检材料经过固定、修整后进行实验，在修整时组织块厚度约3mm；清理组织周围的碎片；根据自己的爱好可将组织块修整美观的外形；修好之后把其放入新的10%的福尔马林中进行复固定最短12h，一般为一天，固定液与第一次一样；把固定的组织块从固定液中取出放入染色瓶中，放在自来水中冲洗24h，之后脱水。组织块经过固定就使内部含有大量的水份，它与石蜡不溶，在浸蜡之前必须把水份去掉。然后脱水透明，一般用低浓度到高浓度酒精做脱水剂逐渐脱去组织块中的水份，具体方法是： （1）80%酒精1h， （2）在换下一瓶时先将组织块用滤纸吸干； （3）第二瓶放95%酒精，时间1h； （4）95%酒精1h或过夜； （5）第四瓶放100%酒精，时间第三瓶过了夜的可用30min没过夜的用1h； （6）最后用两瓶100%酒精各1h； 为了使石蜡进入到组织块内在组织脱水后就应选择一种即可溶于组织又能溶于石蜡的中间物质，把石蜡浸透到组织内，常用的有二甲苯、甲苯，二甲苯的折光指数接近人眼的观察范围，还可使组织块透明。由于二甲苯对组织具有强烈的收缩作用可以使组织变脆、变硬，因此使用二甲苯的时间和剂量是一个关键环节，一般的组织块30min完成。具体的方法有： （1）、苯酒精（100％酒精：二甲苯＝1：1混合）时间10min； （2）、二甲苯Ⅰ10min； （3）、二甲苯Ⅱ10min； 下一步就是浸蜡，浸蜡是在组织透明之后将组织块在熔化的石蜡内浸泡的过程，一般在石蜡箱内完成，为使石蜡充分浸润，需2-3次换蜡，使蜡液一步步的进入到组织内。具体过程： （1）、苯蜡：在溶解的石蜡内加入少量5％二甲苯，温度约60℃，时间1h； （2）、石蜡Ⅰ，时间1h； （3）、石蜡Ⅱ，时间1h； （4）、石蜡Ⅲ，时间1h； 包埋时将已透明的组织块置于已溶化的石蜡中，放入溶蜡箱保温。待石蜡完全浸入组织块后进行包埋：先制备好包埋框(如折叠一小纸盒)，将包埋框放在玻璃板上使包埋框之间、包埋框和玻璃板之间都必须紧密的链接，将熔化的石蜡冷却在70℃左右后才可进行操作，迅速用镊子夹取石蜡Ⅲ中的组织块放入浸有溶解石蜡的包埋框内，使组织放置平整，不能使其悬浮，当上述所有组织块被包埋完成后将石蜡Ⅲ回归到蜡箱中。用凉水冲洗包埋框，使其加速冷却，包埋到第二天再取出凝固的蜡片，石蜡如果是新的必须煮沸，再冷却2-3次使石蜡瓶中的石蜡均匀不含气泡，在此过程中要记得标记。包埋好的组织块变硬，才能在切片机上切成很薄