FasL基因siRNA真核表达载体的构建及意义.pdfVIP

山东医药2009年第49卷第7期 FasL基因siRNA真核表达载体的 构建及意义 王建辉 。雷小婷 ，赵国强 ，张国俊h (1郑州大学第一附属医院，河南郑州450052；2郑州大学基础医学院) [摘要] 目的 构建针对细胞凋亡基因FasL的小干扰RNA(siRNA)表达载体，探讨载体介导的RNA干扰技 术用于肺间质纤维化基因治疗的可行性。方法 依据 siRNA靶序列的设计原则，以FasLmRNA为靶基因，合成两 对编码短发卡结构的两条DNA序列，经退火合成 DNA双链，再克隆至 siRNA表达载体pSilencer2．0中，转化后进 行PCR鉴定和DNA序列测定。将构建的载体用脂质体介导转染人人肺腺癌A549细胞株 ，采用实时荧光定量PCR 法检测细胞FasLmRNA水平变化。结果 成功构建发卡样FasLsiRNA真核表达载体；其转染人肺腺癌A549细胞 后，细胞 FasLmRNA的表达水平显著下降。结论 FasLsiRNA真核表达载体能显著抑制人肺腺癌A549细胞FasL mRNA的表达；本研究为肺间质纤维化的基因治疗奠定了基础。 [关键词] FasL基因；RNA干扰 ；表达载体 [中图分类号] R-33 [文献标识码] A [文章编号] 1002-266X(2009)07-0035-03 ConstructionandsignificationofFasLsiRNAeukaryoticexpressionvector WANGJian—hui，LEIXiao—ting，ZHAOGuo-qiang，ZHANGGuo·凡 (1ThefirstaffiliatedHospitalofZhengzhouUnivemity，Zhengzhou450052，P．R．China) Abstract：Objective ToclonetheexpressionvectorsofsmallinterferingRNA(siRNA)againstFasLgeneandtoe— valuateitsvaluceinthegenetherapyofPIF．Methods AccordingtothecriteriaofdesigningsiRNAtaNetsequence，two FasLsiRNA templateDNA sequencesweredesingedandsynthesized．TheannealedsiRNA templatewasinsertedintosir- NA expressionvectorpSilencer一2．O．whichwastransfectedintoA549cellswithliposomemediationafterPCR identification andDNAsequencing，na dtileeffectofp2．OSi-FasLO11FasLmRNA expressionofhumanlungcarcinomaA549 cellswas detectedbyquantitativefluorescencePCR．Results TheeukaryoticexpressionvectorofshorthairpinsiRNA againstFasL wasconstructedsuccessfullyandFasLmRNA expressionWas inhibited．Conclusion FasLsiRNA eukaryoticexpression vectorpsi2．0-FasLcallinhibittheexpressionofFasLmRNAinhumna hmgcarcinomaA549cells．Thisstudyprovidesba· sisforthegenetherapyofPIF． Keywords：FasLgene；RNAinterference；expressionvector；quantitativefluorescencePCR 间质性肺疾病 (ILD)是一组主要累及肺间质， 月，我们构建了针对细胞凋亡基因FasL的siRNA表 肺泡和(或)细支气管的肺部弥漫性疾病。适度的 达载体，将其转染人肺腺癌 A549细胞，观察其对 细胞凋亡可以清除肺泡腔和肺泡壁中异常增殖的实 A549细胞 FasLmRNA表达的影响，旨在探讨抑制 质