9第九章 目的基因的表达.ppt

* * 第九章 目的基因的表达 遗传信息从DNA到蛋白质的传递过程——中心法则（central dogma）。 一、基因表达： 二、克隆基因的表达： 外源基因在宿主细胞中表达。 宿主细胞： 原核细胞或真核细胞。 用原核生物细胞作宿主。 A dividing E. coli 三、 外源基因在原核细胞中的表达 原核或噬菌体启动子 MCS SD序列 终止子 识别原核细胞的启动子，催化所有的RNA合成。 数个相关的结构基因与其调控区结合形成一个表达的协同单位。 （一）原核生物基因表达的特点 2. 以操纵子为单位 1. 只有一种RNA多聚酶 3. 转录和翻译偶联、连续进行。 核糖体 4. 不含内含子，缺乏转录后的加工系统。 5. 调控主要在转录水平上。 含有一个启始密码子和一段同核糖体16SRNA3’末端碱基互补的序列，叫Shine-Dalgarno（S-D）序列。 6. mRNA的核糖体结合位点 Shine-Dalgarno（S-D）sequence: （二）原核表达系统的注意事项 外源基因不能带有内含子。 2. 必须用cDNA。 3. 不能直接用真核基因组DNA。 4. 必须利用原核细胞的调控原件（启动子等） 5. 防止外源基因产物对宿主细胞的毒害。 是DNA上的能与RNA聚合酶结合并能起始mRNA合成的序列。 大肠杆菌的所有启动子中都有两段一致顺序（consensus