单甲氧基聚乙二醇化学修饰人血清白蛋白及产物性能表征.pdfVIP

安 徽 化 工 Vo1．39．No．6 22 瀵 6月Jt~] ANHUICHEMICAL lNDUsTRY DeC．2Ol3 · 科研 与开发 · 单甲氧基聚乙二醇化学修饰人血清 白蛋 白及产物性能表征 杨庆华 ，冯乙巳 ，徐 超 (1．合肥工业大学医学工程学院，安徽合肥230009；2．合肥工业大学化学工程学院，安徽合肥230009) 摘要：用三光气活化的单甲氧基聚乙二醇5000 (mPEG)和N一羟基琥珀酰亚胺 (NHS)反应制备单 甲氧基聚乙二醇琥珀酸亚胺酯 (SC-mPEG)，SC—mPEG修饰人血清白蛋白(HSA)制备 mPEG—HSA。傅里叶变换红外光谱仪(胛一IR)、紫外分光光度计 (uv)和高效液相 色谱仪(HPLC)对产物结构予以分析表征。结果表明，已经成功得到 目标产物 ，mPEG的平均活化度为75％，SC—mPEG与HSA的平均偶 联度为 45％。 关键词：人血清蛋白；单甲氧基聚乙二醇；化学修饰；表征 doi：10．3969~．issn．1008—553X．2013．06．006 中图分类号：R331 文献标识码：A 文章编号：1008—553X(2013)06—0022—04 人血清 白蛋 白(HumanSerumAlbumin，HSA)是 由 病6[,71。本研究拟采用使用最为广泛的mPEG50004¨味修 585个氨基酸残基组成的单链无糖基化的球形蛋白质， 饰作为常用的药物载体 白蛋 白，改善其在体 内的稳定 分子量 66000～69000，等电点4．7～4．9，是人血浆的重要 性 ，延长在生物体内的循环时间等，以期将来作为一种 组成部分。白蛋白具有多种生理功能，它可以增加血容 良好的药物载体应用于生产实际。 量和维持血浆胶体渗透压，调节组织与血管之间水分的 1实验部分 动态平衡；它可以输送不同的营养物质，也可以将有毒 1．1材料与仪器 物质输送到解毒器官；在氮代谢障碍时，可以为组织提 材料 ：人血清 白蛋白(浓度 20％，安徽大安生物制 供营养。在医药领域，它也可以用作蛋 白质或酶类产品 品药业有限公司)；单 甲氧基聚乙二醇 5000 (瑞士 的稳定剂或新剂型的微球基材，在人体内能被降解吸 ClariantChemicals上海分公司)；三光气 、N一羟基琥珀酰 收，无抗原性 ，无过敏反应，使用安全。白蛋白是许多内 亚胺(NHS)以及其他试剂均为国产分析纯。 源因子和外源药物的载体，药物和血清 白蛋 白结合后， 仪器：723分光光度计 (上海精密科学仪器有限公 可以增加其生物利用度，同时增加在体内的半衰期。但 司)；傅里叶变换红外光谱仪(天津天光光学仪器有限公 是由于白蛋白在人体内降解速度快，因而存在体内稳定 司)；Agilentl100LC高效液相色谱仪 (武汉大成科学仪 性差，易变性失活，易于从血液循环中清除等缺陷；单独 器有限公司)。 作为药物载体时缓释时间较短 ，使病人给药次数增加， 1_2实验方法 经济负担加重，这些都使白蛋白的广泛使用受到限制。 1．2．1单甲氧基聚乙二醇甲酰琥珀酰亚胺酯(SC—mPEG) 使用可溶性高分子聚合物对蛋白质进行化学修饰，可以 的制备[81 有效改变蛋 白质药效学和药动学。例如，CoussonsP．J．等 称取mPEG50003．0g、 光气0．355g，溶于 12mL 用葡萄糖修饰人血清蛋 白，DavidS．Hage等用苯妥英修 二氯甲烷中，缓慢加人无水^二乙胺0．6mL，室温搅拌反 饰人血清蛋 白，都收到了良好的效果I1．21。PEG作为一种 应过夜。反应结束后6~C条件下向反应液中滴加乙醚， 常用的生物材料，因其与蛋白质的良好相容性而受到广 直到产物沉淀完全，乙醚用量约为30mL。过滤干燥后将 泛关注。采用PEG修饰可以增加蛋 白质的溶解性和稳 产物再次溶解于二氯甲烷，再以乙醚沉淀，过滤，干燥， 定性 ，延长半衰期，降低免疫原性和抗原性以及提高其 得 白色固体 ，备用。 膜渗透