亲和色谱法的进展65697.pdfVIP

文献综述 亲和色谱法的进展* 张津辉 蒋中华 陈惠鹏 马立人 军（事医学科学院放射医学研究所 北京 10085） 提 要 概述了亲和色谱法分离机理、色谱填料及其应用的新进展，着重介绍了亲和固定相中配基发掘的新途 径。全文包括66篇文献。 关键词 亲和色谱法，配基，分离纯化 分类 号：O6 8 1 前言 论上讲几乎所有具有相对特异性和一定亲和力的两 亲和色谱法是根据生命现象中生物大分子间高 种分子均可用于亲和色谱。近期报道的例子有以单 亲和力与高专一性可逆结合而设计的一种独特的色 克隆抗体为配基纯化RNA聚合酶(RNApoly- 谱谱分 技离敕方术椒法ā＝的近昀来飞此 速 孀发着派谱展桌砺，论亲鄣纳和钊胙色芯亢谱蜕法 的 理 论 和 应 用 都 有 m ase) ⒁以愿 制 蛋鞍白 A ( licatio o tein A)为 配 基 纯 化 解 旋 酶 (h e lica se ) 、 以 延 伸 因 子 T u (e lo n g a tio n 了长足的进展。 factorTu)为配基纯化转移RNA等[8～?9。 2 分 掷离 机 制 的奶 探剿 索 在 充 分 利 用 天 然 亲 和 作 用 的 同 时 ， 天 然 配 基 关于生物大分子在亲和色谱法中的保留机理及 的功能表位进行人工模拟形成了生物模拟亲和色谱 色谱过程数学模型的研究一直是一个相对薄弱的环 (biomimeticaffinitychromatography)[20]。这一类配 节，这主要是因为对生物大分子间亲和结合的机理 基包括染料[21]、氨基酸类似物[22]、多氟吡啶[23]、金属 离子螯合剂羀[2426]及巯基化合物[27]等 它们制备容 及系疤特数 过点懔大了 且私得在不煌固透赋定彻相，而上且的夷吸标附分等子釉温在线两多相 不间 呈分 配线 易，造价低廉，稳定性好，尤其适用于大规模重组蛋 性[1]；另外，在实际操作中往往样品成分复杂，并且 白质的生产；与蛋白质或核酸的结合机理更为明确， 柱 子 呈 过 载 状 态 传统 的 观 念钊认衔为 亲 和蜕色 谱资 实导 际 上 通过设计合 活 的吸 附与洗 脱条 件 ，可 进行 多元组分 是 一 种 只能 起 组 分 分 离 作 用 的选 择 性 过 滤 法 ，这 种 分离。 看法不仅不能定量描述色谱过程，而且也解决不了 除了化学合成模拟外，还可以对蛋白质类配基 多元组分分离的问题。对一些亲和力较弱[2.3]或结合 进行化学修饰[28]或从基因水平方面进行改造[29,30。 机 制 相 对 简 单 [4.5]的那亲缀和 色 谱 的亩定量 研芯 究 可以 为 上 组楹 化学 及群集 筛秆技 术也 应用于亲和色 谱配基 的 述问题的解决提供一些有益的经验。 选择。应用噬菌体抗体库技术，理论上可以筛选任意 亲和色谱法机制的探索归根到底都有赖于固定 一种化合物的抗体[31]，包括那些不能用常规方法对 相的 亲上和的 配色 基谱 和湍理 论目 标中攴分配肿子基 之-配间体渥作饔亲用和的纳作深钊用入的研 研 究 都芯 早是期 动物讲行免疫的物质；同理也可用噬删体肽库法筛 选与任意氨基酸序列结合的肽段[32]。应用体外分子 建立在均相反应和宏观平衡态热力学的基础上的。