油棕猝倒病菌实时荧光PCR检测方法.pdfVIP

艋物保 2012，38(6)：98—100 油棕猝倒病菌实时荧光 P( 检测方法 张慧丽 ， 王建峰 ， 段维军 ， 徐 瑛 ， 高姗姗 ， 陈先锋 (1．宁波出入境检验检疫局，宁波 315012；2．宁波大学，宁波 315211) 摘要 油棕猝倒病菌(Pythiumsplendens)是我国进境植物检疫性有害生物。本试验根据P．splendensrDNAITS区序 列，设计了实时荧光PCR引物 pyspF／pyspR及荧光探针 pyspT，建立了P．splendens荧光PCR检测方法，检测灵敏度 为0．012Pg／ 。 关键词 油棕猝倒病菌； 实时荧光PCR 中图分类号： S432．44 文献标识码 ： A DOI： 10．3969／j．issn．0529—1542．2012．06．021 Detectionandidentfiication Pythium splendensusingreal-timefluorescentPCR ZhangHuili，WangJianfeng，DuanWeijun， XuYing， GaoShanshan。， ChenXianfeng (1．M 的BureauofExitEntryInspectionandQuarantine，M 幻 315012，China； 2．NingboUniversity，M b0 31521l，hC ina ) Abstract Pythium splendensisoneoftheentryplantquarantinepestsinChina．ThespecificprimersetspyspF／ pyspR andTaqM anprobepyspTweredesignedbasedontheregionofITSofP．splend ens．Thetechniqueofreal— timefluorescentPCR wasestablishedtodetectP ．splend ens．Experimentalresultsshowedthatthelimitsofdetec— tionforP．splend enswere0．012Pg／L． Keywords Pythium splendens； real—timefluorescentPCR 华丽腐霉 (PythiumsplendensBraun)引起的油 ～ 2()()个拷贝。ITS1和ITS2常被合称为 ITS，并且 棕猝倒病是油棕上的一种重要真菌病害¨1]，该病菌 5．8SrDNA基因也被包括在 ITS之 内。rDNA上 寄主范围很广，除侵染油棕苗以外，还能危害上百种 5．8S、18S和 28SrDNA基因序列进化缓慢而相对 经济作物，引起寄主幼苗整株失水萎蔫[2]。它主要 保守，但这三个基因序列之问的ITS序列的进化则 分布在 比利时、法国、德 国、意大利、荷兰、日本、坦桑 相当迅速，因而rDNA序列广泛用于真菌各级水平 尼亚、刚果和美国的夏威夷、佛罗里达、宾夕法尼亚 的系统学研究__7]。本研究通过对病原菌及相关种的 州，国内台湾、海南 曾有报道_2]，但其他地区未见发 rDNA ITS序 列进 行 比较 分 析，设 计 了针 对 生报道 。该病菌通过带菌土壤、生长介质和营养繁 P．splendens的引物和探针，建立了P．splendens实 殖材料传播。在 2007年被列入中华人民共和国进 时荧光PCR检测方法，为 口岸检验检疫提供快速、 境植物检疫性有害生物名录。针对P．splendens的 准确的检测技术。 检测 已有特异性 引物[5]、PCR-RFLPl6]、核糖体 D