实时荧光定量PCR技并及在畜牧兽医中的应用.pdfVIP

lo． 軎医研究 1．3 荧光探针和荧光染料 实时荧光定量 ：R技术 RT—FQ—PCR依靠荧光探针或荧 光染料来相对间接确定样本起始拷贝 及在畜牧兽医中的应用 数 。 1．3．1 SYBRGreenIDNA结合染料 ： 徐 波t 张建超z ’ SYBRGreenI是一种双链DNA结合染 (1湖南农业大学外国语学院，湖南 长沙 410128；2湖南省浏 阳畜牧水产局) 料 ，与双链DNA结合后 ．其荧光增强约 l000倍 。在PCR反应体系 中．加入过 中图分类号：S811．3 文献标识码：A 文章编号：1008—0414(2009)12--0010-03 量SYBR荧光染料 ，SYBR荧光染料特 摘 要 RT—FQ—PCR技术是一种最新pcR技术，具有特异性强、灵敏度高、 异性地掺人DNA双链后 ，发射强荧光 重复性好 、定量准确 、速 度快、全封 闭反应 等优 点，在 畜牧 兽医中已得 到了广泛的应 信号，而不掺入链 中的SYBR染料分子 用，虽然该技术 目前仍存有许多有待解决的问题，但 因其所具有的独特优势，必定 仅有微弱荧光信号背景 。荧光信号的 会在生命科学领域得到更广泛的应用。该文就RT—FO—PCR概念 、原理、方法、应用、 增 加 与 PCR产 物 的 增 加 同 步 。 存在 问题及应用前景等作 了综述 。 SYBRGreenI通用性好 。与所有 的双链 关键词 实时荧光定量PCR 应用 畜牧兽医 DNA相结合 ，不必因为模板不 同而特 别定制 ，价格相对较低 。 多聚酶链 反应 polymer．sechain 一 般将PCR反应前l5个循环 的荧光信 1．3．2 Taqman探针 ：TaqMan探针是一 reaction，PCR)技术 自20世纪80年代 以 号作为荧光本底信号 ，荧光域值是 种寡核苷酸探针 ．荧光基 团连接在探 来 ，以其简便、快速 、灵敏 的特点一度 PCR3-15个循环荧光信号标准差的 针的5末端 ，而淬灭基团在3末端 。当 成为实验诊断学的热点；但其易污染、 l0倍 ，荧光域值设定在PCR扩增的指 探针与靶序列配对时．荧光基 团发射 假 阳性及不能定量等 问题也 日益突 数期。 的荧光团与3末端 的淬灭基 团接近而 出。易导致不 良后果，使其临床应用受 1．1．3 CT值 ：表示每个PCR反应管内 被淬灭。在进行延伸反应时 ，聚合酶的 到限制。近年来出现的实时荧光定量 荧光信号到达设定的域值时所经历的 5外切酶活性将探针切断．使得荧光 PCR freal—timefluorescenceQuantity 循环数 。研究表 明，各模板 的CT值与 基 团与淬灭基 团分离 ．发射荧光 。随着 PCR，RT—VQ—PCR1技术集PCR和DNA 该模板的起始拷 贝数 的对数存在线性 扩增循环数的增加 ．释放出来的荧光 探针杂交技术 的优点为一体 ．直接探